| 研究課題/領域番号 |
16K09672
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
山門 穂高 京都大学, 医学研究科, 助教 (10378771)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 多系統萎縮症 |
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| 研究実績の概要 |
多系統萎縮症（MSA）、レビー小体病型認知症（DLB）、正常高齢者の脳サンプルよりエクソソームを抽出し、DLBと、特にMSAにおいてexosome分画にαシヌクレイン(αsyn)の凝集を認めることを確認した。この抽出exosomeをαシヌクレイン-GFP融合タンパク質をレンチウイルスで発現させた神経細胞（neuro2a, SH-SY5Y)・オリゴデンドロサイト細胞株(MO3.13, Oli-neu)への取り込みと凝集体形成を比較検討した。さらに、αシヌクレインを過剰発現させたαシヌクレイン BAC（Bacterial Artificial Chromosome）トランスジェニックマウスにこれらのexosomeをinjectionし、現在病理学的な解析を行っている。オリゴデンドロサイト特異的なαシヌクレイン蓄積を説明する他の可能性としてαシヌクレインの種（seed）による違いを検討するため、健常人、DLB、MSA患者脳からPBS可溶性分画、SDS不溶性分画をseedとしてRT-QUIC（real-time quaking-induced conversion）法でseedの増幅を試み、seed依存性のαシヌクレインfibril形成が生じるかを検討した。その際、incubation bufferの組成、振盪数（shaking速度）、αシヌクレイン monomer濃度、spikeするseedの量などの条件検討に時間を要した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
多系統萎縮症（MSA）、レビー小体病型認知症（DLB）、正常高齢者の脳サンプルよりエクソソームを抽出し、DLBと、特にMSAにおいてexosome分画にαシヌクレイン(αsyn)の凝集を認めることを確認した。この抽出exosomeをαシヌクレイン-GFP融合タンパク質をレンチウイルスで発現させた神経細胞（neuro2a, SH-SY5Y)・オリゴデンドロサイト細胞株(MO3.13, Oli-neu)への取り込みと凝集体形成を比較検討した。さらに、αシヌクレインを過剰発現させたαシヌクレイン BAC（Bacterial Artificial Chromosome）トランスジェニックマウスにこれらのexosomeをinjectionし、現在病理学的な解析を行っている。オリゴデンドロサイト特異的なαシヌクレイン蓄積を説明する他の可能性としてαシヌクレインの種（seed）による違いを検討するため、健常人、DLB、MSA患者脳からPBS可溶性分画、SDS不溶性分画をseedとしてRT-QUIC（real-time quaking-induced conversion）法でseedの増幅を試み、seed依存性のαシヌクレインfibril形成が生じるかを検討した。その際、incubation bufferの組成、振盪数（shaking速度）、αシヌクレイン monomer濃度、spikeするseedの量などの条件検討に時間を要した。
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| 今後の研究の推進方策 |
①神経細胞・オリゴデンドロサイト（ODC）細胞株においてasyn凝集体を定常的に形成する細胞株を樹立し、細胞株特異的なasyn凝集transferのexosomeが関与するメカニズムを解析する。②への取り込みと凝集体形成を比較検討した。さらに、αsynを過剰発現させたasyn BACトランスジェニックマウスに疾患脳由来exosomeをinjectionしたサンプルを解析する。③ODC特異的なαsyn蓄積を説明する他の可能性としてαsynの種（seed）による違いを検討するため、健常人、DLB、MSA患者脳から抽出したfibrilをseedとしてRT-QUICを行い、形成されたseed依存性のasyn fibrilを生化学的に解析、またasyn BACトランスジェニックマウスにinjectionを行い、凝集体の性質を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
旅費の不使用により生じた。本年度の学会出張で使用予定である。
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