研究課題/領域番号 |
16K09741
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研究機関 | 山梨大学 |
研究代表者 |
滝澤 壮一 山梨大学, 総合研究部, 助教 (80456467)
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研究分担者 |
北村 健一郎 山梨大学, 総合研究部, 教授 (10304990)
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研究期間 (年度) |
2016-10-21 – 2019-03-31
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キーワード | 糖尿病 / 脂肪肝 / インスリン抵抗性 / プロスタシン |
研究実績の概要 |
肝臓特異的プロスタシン過剰発現(LTg)マウスを用いた検討 1) 高脂肪食負荷による耐糖能評価:7週齢の雄マウスに高脂肪食を与え、野生型マウスと耐糖能を比較した。マウスの個体数を増やし比較したところ、LTgマウスで明らかな耐糖能改善傾向を認めた。腹腔内ブドウ糖負荷試験、ピルビン酸負荷試験、インスリン負荷試験でもLTgマウスでの耐糖能の改善が確認できた。その結果からインスリン分泌能(HOMA-β)とインスリン抵抗性(HOMA-IR)を評価したところ、LTgマウスではインスリン抵抗性が低下していた。 2) 肝組織切片の検討:高脂肪食飼育をしたLTgマウスの肝臓から肝組織切片を作製し野生型マウスと比較した。その結果、LTgマウスの肝臓では脂肪肝の発症が抑制されていた。また、両群のマウスの肝臓内中性脂肪量を測定したところ、LTgマウスで肝臓内中性脂肪量が有意に減少していることが確認された。 3) インスリンシグナル伝達の検討:絶食条件下で下大静脈から速効型インスリンを静注し、5分後に採取した肝臓を使用し、インスリンシグナル下流にあるpAktの増減をウエスタンブロットで確認したところ、LTgマウスでpAktの増加傾向を認めた。 4) DNAマイクロアレイによる新規標的因子の検索:高脂肪食飼育をしたLTgマウス、野生型マウスの肝臓からRNAを抽出し、DNAマイクロアレイを行い、糖尿病発症抑制に関わる新たな標的因子を検索した。その結果、LTgマウスでは脂肪肝に関わる遺伝子群が有意に低下していた。このDNAマイクロアレイの結果は肝組織切片の観察結果と一致しており、脂肪肝発症抑制が耐糖能改善と関連している可能性が示唆された。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初予定していた肝臓特異的プロスタシン過剰発現(LTg)マウスを用いた検討を順調に行えている。実験結果から脂肪肝の発症に差があることが新たにわかったため、その点について検討する時間を追加で要した。
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今後の研究の推進方策 |
本年度の実験結果から脂肪肝の発症の差に焦点を当てて実験を進める予定である。具体的には肝臓培養細胞であるHepG2にプロスタシンを過剰発現させ、脂肪肝に関わる遺伝子群、蛋白レベルの変化を確認する。プロスタシンが細胞膜に存在する蛋白に直接作用しているかも検討する。 また、ヒトの糖尿病患者、脂肪肝患者の血清を用いて血中プロスタシン濃度を測定する。測定用キットとしてHuman Prostasin ELISA Kit (RayBiotech) を使用する。糖尿病に関しては劇症1型糖尿病、急性発症1型糖尿病、緩徐進行1型糖尿病、2型糖尿病の各病型別の患者血清も用いて測定する。さらに、各患者のインスリン分泌能、インスリン抵抗性などのデータと血中プロスタシン濃度を比較し、プロスタシンが糖尿病の病態にどのように関連しているかも検討する。
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