| 研究課題/領域番号 |
16K09844
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| 研究機関 | 福井大学 |
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研究代表者 |
細野 奈穂子 福井大学, 学術研究院医学系部門(附属病院部), 助教 (50509312)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | スプライスソーム / 骨髄系悪性腫瘍 / Luc7L2 |
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| 研究実績の概要 |
平成28年度はスプライスソーム(U1snrp)であるLUC7L2遺伝子の発現低下細胞を作成し検討を行った。LUC7L2の遺伝子発現を抑制する目的で、蛋白コーディング領域と3'側の非翻訳領域を標的としたshRNAを作成した。これらのshRNAを骨髄系白血病細胞株HL60, K562にレンチウイルスを用いた感染実験を行いshRNAの導入を行った。shRNAの導入効果は良好であり、RNA干渉により、LUC7L2の発現がそれぞれ20％、50％、70％に抑制された細胞株が得られた。これらのLUC7L2低発現細胞では細胞増殖がコントロール細胞と比べ遅く、またLUC7L2発現が低いほど、細胞増殖は遅い傾向にあった。増殖が遅くなる原因として、細胞周期の検討を行ったが、コントロール細胞とLUC7L2発現低下細胞群との間で細胞周期の変化はみられなかった。またLUC7L2低発現細胞(HL60/shLUC7L2, K562/shLUC7L2)では細胞表面にbreb様の突起物が形成され、細胞同士が接着する現象が観察された。これらの形態変化はレンチウイルス未感染細胞、およびコントロール細胞ではみられなかった事より、LUC7L2発現低下に起因する細胞形態の異常と考えられた。これらの細胞株において、細胞増殖機転および細胞形態に影響を与える原因を追究すべく、遺伝子の発現変化、スプライシングの変化をRNAシークエンシング法を用いた解析にて検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
初年度にCD34陽性造血幹細胞を用いた発現低下系を作成予定であったが、CD34陽性細胞の培養環境の設定に時間を要し、実験を遂行しうる十分量の細胞が得られず進捗がおくれた。現在は培養環境が安定し、今後予定している実験を遂行できるものと思われる。
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| 今後の研究の推進方策 |
進捗状況は遅れているものの、研究計画の変更を要するものではないため、当初の予定通り勧めていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初の予定より実験の進捗が遅滞したことにより、RNA-sequencingの実験が年度をまたいだため、次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
年度をまたいだが、当初の予定通りRNA－sequencingを用いた解析に使用する。
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