| 研究課題/領域番号 |
16K09900
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
川人 豊 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (50336731)
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| 研究分担者 |
河野 正孝 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (60405256)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | AIF-1 / 肺線維症 / ブレオマイシン |
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| 研究実績の概要 |
リコンビナントAIF-1/抗AIF-1抗体の作成
リコンビナントAIF-1は、ヒトAIF遺伝子を末梢血リンパ球のcDNAよりPCR法にて増幅させ、得られたDNA fragmentを、GST purification systemと抗AIF-113-129抗体アフィニティークロマトグラフィーにより、融合タンパク質を精製した。モノクローナル抗体は、上記蛋白をウサギに免疫し血清を精製後、マウスの脾臓細胞とマウスミエローマ細胞を共存培養で細胞融合し、ハイブリドーマを作成して精製した。
ブレオマイシン誘導肺線維症マウスモデルにおけるAIF-1の発現検討
8～10週齢のオスC57/BL6マウスに、ブレオマイシン経気道散布し、ブレオマイシン誘導性のマウス肺線維症モデルを作成した。HE染色、Masson-Trichrome染色で肺線維化形成のある事を確認の上、同モデル使用し。以下の結果を得た。急性期において、AIF-1は肺胞マクロファージおよひ肺胞洗浄液中にAIF-1が高発現を示し、リコンビナントAIF-1は単球細胞株であるRAW2647細胞およびC57/BL6マウス由来の肺線維芽細胞からのTNFα、IL6産生を促進させた。また肺線維芽細胞より好中球のケモカインであるCXCLl(KC)の産生も上昇をさせることも確認した。線維化に関与する機序として、マクロファージからのTGF-βの産生増加、培養線維芽細胞の遊走を誘導している事を明らになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
リコンビナントAIF-1/抗AIF-1抗体の作成を作成した。また、ブレオマイシン誘導肺線維症マウスモデルにおける急性・慢性期での肺線維化に関与するAIF-1の機能解析を行い、AIF-1がケモカインを誘導し、線維芽細胞遊走を刺激することを明らかにした。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在、慢性線維化期での発現細胞を詳細に同定中で、肺間質の線維化を惹起するAIF-1の生物活性について、特に繊維芽細胞のαMSA発現やepithelial-mesenchymal transition (EMT）への関与を検討していく。
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