| 研究課題/領域番号 |
16K09915
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| 研究機関 | 産業医科大学 |
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研究代表者 |
花見 健太郎 産業医科大学, 医学部, 助教 (50441853)
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| 研究分担者 |
久保 智史 産業医科大学, 医学部, 助教 (70461548)
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| 研究期間 (年度) |
2016-10-21 – 2019-03-31
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| キーワード | 樹状細胞 / 破骨細胞 / 抗原提示能 |
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| 研究実績の概要 |
破骨細胞は通常単球から分化するが、特に炎症環境下では、樹状細胞からの分化も報告されており、新しい破骨細胞サブセットは、通常の破骨細胞にはないリンパ球刺激能を有し、免疫反応とともに骨破壊に重要な役割を示す可能性が示唆されている。しかし、ヒト樹状細胞由来破骨細胞の特徴について解明されておらず、本研究では炎症病態における樹状細胞由来破骨細胞の分化機序、機能、病態への影響に関して検討を行った。
研究期間内において、関節炎病態における樹状細胞由来破骨細胞（dendritic derived osteolast; DCOC）の役割を解明するために、以下の事を明らかにした。
１．樹状細胞由来破骨細胞（dendritic derived osteolast; DCOC）分化誘導系を構築した。：健常人末梢血よりCD１４陽性細胞を分離し、GM-CSF刺激を加える。分化培養開始後６日目にM-CSF刺激、９日及び１５日にM-CSF+RANKL刺激をそれぞれ行い、２１日目まで培養を行い、DCOC分化誘導を行った。
２．DCOCが有する破骨細胞様形質の評価：培養開始後２１日目にTRAP染色を行い、TRAP陽性細胞数・細胞核数・細胞融合について評価した。DCOC分化誘導前・分化培養開始９日目・２１日目の細胞からｍRNAを抽出し、定量性PCR法にてカテプシンK、NFATｃ１、DC-STAMPの発現を測定した。ヒト単球由来破骨細胞とDCOCを象牙切片スライス上で培養開始後、２１日目にピットフォーメイションアッセイにて骨吸収窩面積の定量を行った。
３．DCOCの樹状細胞様性質の価：分化培養開始２１日目のDCOCにおいて細胞表面マーカーCD80/86の発現を免疫蛍光染色法にて評価し、培養開始１８日目より２１に目までCD4陽性T細胞と共培養を行い、２１日目にサイミジンアップテイク法により細胞増殖能を評価した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
関節炎病態における樹状細胞由来破骨細胞（dendritic derived osteolast; DCOC）の役割を解明するため、以下の３段階を設定している。
１．ヒト単球、ラット骨髄細胞を用いたin vtroでの解析
２．ラット関節炎モデルを用いたin vivoでの解析
３．関節リウマチ患者検体を用いた解析
現在in vtroでの解析がほぼ終了し、in vivoの解析へ移行しているが、当初の予定よりやや遅れて推移している。
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| 今後の研究の推進方策 |
・関節炎滑膜におけるる樹状細胞由来破骨細胞（dendritic derived osteolast; DCOC）と、関節炎及び関節破壊との関連を明らかにするため、ラット関節炎モデルを用いたin vivoでの解析を行う。
・滑膜組織におけるDCOC様細胞と、関節炎・関節破壊など臨床指標との関連を明らかにするため、関節リウマチ患者検体を用いた解析を行う。
以上の解析によって、DCOCが関節炎の維持、増悪に重要な役割を示している可能性を明らかにする。
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