研究課題
本研究では炎症病態における樹状細胞由来破骨細胞の分化機序、機能、病態への影響に関して検討を行った。１．樹状細胞由来破骨細胞（dendritic derived osteolast; DCOC）分化誘導系を構築した。：健常人末梢血よりCD１４陽性細胞を分離し、GM-CSF刺激を加え、分化培養開始後６日目にM-CSF刺激、９日及び１５日にM-CSF+RANKL刺激をそれぞれ行い、２１日目まで培養を行い、DCOC分化誘導を行った。２．DCOCが有する破骨細胞様形質の評価：培養開始後２１日目にTRAP染色を行い、TRAP陽性細胞数・細胞核数・細胞融合について評価した。DCOC分化誘導前・分化培養開始９日目・２１日目の細胞からｍRNAを抽出し、定量性PCR法にてカテプシンK、NFATｃ１、DC-STAMPの発現を測定した。ヒト単球由来破骨細胞とDCOCを象牙切片スライス上で培養開始後、２１日目にピットフォーメイションアッセイにて骨吸収窩面積の定量を行った。３．DCOCの樹状細胞様性質の価：分化培養開始２１日目のDCOCにおいて細胞表面マーカーCD80/86の発現を免疫蛍光染色法にて評価し、培養開始１８日目より２１に目までCD4陽性T細胞と共培養を行い、２１日目にサイミジンアップテイク法により細胞増殖能を評価した。４．関節炎滑膜におけるる樹状細胞由来破骨細胞（dendritic derived osteolast; DCOC）と、関節炎及び関節破壊との関連を明らかにするため、ラット関節炎モデルを用いたin vivoでの解析を行った。５．滑膜組織におけるDCOC様細胞と、関節炎・関節破壊など臨床指標との関連を明らかにするため、関節リウマチ患者検体を用いた解析を行った。
すべて 2019 2018
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