自己免疫・喘息疾患におけるヒト遊離型TIM-4の検出・機能解析と病態的意義

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K09924
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 秋葉 久弥 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60338316)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 免疫学 / アレルギー / 喘息 / 炎症

研究実績の概要

本研究は、ヒト遊離型TIM-4(hsTIM-4)の測定方法を確立して、その存在を証明し、喘息の患者血清からhsTIM-4の検出を試みて発症や病態との相関を明らかにすることを目的としている。
サンドイッチELISAによってhsTIM-4を検出するためには、TIM-4分子のそれぞれ異なる部位に結合することができる最低2種類のモノクローナル抗体が必要である。これまでに、マウスの系統や免疫方法等、条件を変えて精製TIM-4タンパク質をマウスに免疫し、数十種類の抗hTIM-4モノクローナル抗体を得たが、結果、すべての抗体がTIM-4の同じ部位に結合するものであった。現在、免疫する動物をラットに変えて試みている。
以前、遊離型マウスTIM-4が存在することを証明したように、hTIM-4遺伝子導入細胞にhsTIM-4が存在することを培養上清と抗hTIM-4モノクローナル抗体を使ったSDS-PAGE, Western blotting実験から明らかにした。この時、hTIM-4 cDNAを通常使用する発現ベクター（pMKIT, pcDNA）に挿入してヒト培養細胞に発現させた際には非常に発現しづらく、レトロウイルスベクターを用いて発現させたことから、hTIM-4は細胞の種類に依存するなど特別な発現制御機構が存在するのではないかと思われる。現在、この発現メカニズムを明らかにする方法を検討中である。
一方で、hsTIM-4のC末端アミノ酸配列を決め、組換えDNA技術によりリコンビナントhsTIM-4を作製して、ヒトT細胞やマスト細胞におけるhsTIM-4の機能解析を行う予定でいたが、hTIM-4が非常に発現しづらいためアミノ酸分析に必要な量が十分得られずに、未だ切断部位を明らかにすることが出来ずにいる。hsTIM-4の遊離切断部位の同定が出来ずにいることが多くの研究・実験の進展を妨げている。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of tenascin-C as a novel biomarker for asthma: utility of tenascin-C in combination with periostin or immunoglobulin E (2018)
  • 著者名/発表者名: Yasuda M, Harada N, Harada S, Ishimori A, Katsura Y, Itoigawa Y, Matsuno K, Makino F, Ito J, Ono J, Tobino K, Akiba H, Atsuta R, Izuhara K, Takahashi K.
  • 雑誌名: Allergy Asthma Clin Immunol 巻: 14 ページ: 72
  • DOI: 10.1186/s13223-018-0300-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combination of TWEAK and TGF-β1 induces the production of TSLP, RANTES, and TARC in BEAS-2B human bronchial epithelial cells during epithelial-mesenchymal transition (2018)
  • 著者名/発表者名: Matsuno K, Harada N, Harada S, Takeshige T, Ishimori A, Itoigawa Y, Katsura Y, Kodama Y, Makino F, Ito J, Atsuta R, Akiba H, Takahashi K.
  • 雑誌名: Exp Lung Res 巻: 44 ページ: 332-343
  • DOI: 10.1080/01902148.2018.1522558.
  • 査読あり
• [学会発表] Circulating levels of tenascin-C as type 2 biomarkers in the patients with asthma (2018)
  • 著者名/発表者名: M. Asaji, N. Harada, S. Harada, A. Ishimori, Y. Katsura, Y. Itoigawa, K. Matsuno, F. Makino, J. Ito, J. Ono, K. Tobino, H. Akiba, R. Atsuta, K. Izuhara, K. Takahashi
  • 学会等名: 第58回日本呼吸器学会会学術講演会
• [学会発表] Chitin Induced Airway Inflammation and Production of Prostaglandin E2 (2018)
  • 著者名/発表者名: T. Takeshige, N. Harada, K. Matsuno, A. Ishimori, Y. Tanabe, H. Sasano, A. Nakamura, S. Harada, Y. Katsura, F. Makino, J. Ito, R. Atsuta, H. Akiba, K. Takahashi
  • 学会等名: 第58回日本呼吸器学会会学術講演会
• [学会発表] 気管支喘息のバイオマーカーとしての血清テネイシンC値の可能性 (2018)
  • 著者名/発表者名: 浅地美奈、原田紀宏、原田園子、石森絢子、桂蓉子、糸魚川幸成、松野圭、牧野文彦、伊藤潤、小野純也、飛野和則、秋葉久弥、熱田了、出原賢治、高橋和久
  • 学会等名: 第67回日本アレルギー学会学術集会
• [学会発表] ヒト気道上皮細胞におけるキチンによるPGE2産生誘導 (2018)
  • 著者名/発表者名: 竹重智仁、原田紀宏、石森絢子、松野圭、原田園子、三道ユウキ、上田翔子、安部寿美子、中村愛、笹野仁史、田辺悠記、桂蓉子、牧野文彦、伊藤潤、秋葉久弥、熱田了、高橋和久
  • 学会等名: 第67回日本アレルギー学会学術集会
• [学会発表] 免疫チェックポイントTIMの慢性炎症における働き (2018)
  • 著者名/発表者名: 秋葉久弥
  • 学会等名: 第36回呼吸器・免疫シンポジウム
  • 招待講演
• [学会発表] Expression of TIM-4 in normal cornea and corneal grafts (2018)
  • 著者名/発表者名: A. Takeda, H. Taniguchi, T. Kunishige, H. Akiba, H. Yagita, J. Hori
  • 学会等名: The Annual Meeting of the Association for Research in Vision and Ophthalmology
  • 国際学会
• [学会発表] Circulating levels of soluble TIM-4 in the patients with asthma (2018)
  • 著者名/発表者名: Yuki Tanabe, Hisaya Akiba, Norihiro Harada, Kei Matsuno, Jun Ito, Kazuhisa Takahashi, and Sachiko Miyake
  • 学会等名: 第47回日本免疫学会学術集会
• [備考] 順天堂大学医学部免疫学
  • URL: https://www.juntendo.ac.jp/graduate/laboratory/labo/meneki/home.html