研究課題
Purpose: Pro-inflammatory cytokines are known to modulate brain excitability. NLP family pyrin domain containing 3 (NLRP3) forms inflammasomes where precursor pro-IL-beta is cleaved into mature IL1-beta. Human NLRP3 polymorphisms are associated with susceptibility to various inflammatory diseases. To assess whether NLRP3 polymorphism confers increased susceptibility to acute encephalopathy with febrile status epileptics (AESD), we conducted case control studies. Methods: We recruited 103 Japanese AESD patients (52 males and 51 females; mean age, 23.0 months). Written informed consents were obtained from the patients' parents. We analyzed SNPs in NLRP3 by direct sequencing. We compared allelic frequency and genotype distribution of SNPs between AESD and controls including data in 1000GENOME project and HapMap-JPT. Results: We found a significant association of T allele at rs10802501 T> A in NLRP3 3'UTR with AESD (p=0.034). Genotype distribution was not significantly different between AESD and controls (p=0.089). None of the AESD patients had AA genotype. An odd ratio (TT versus TA+AA) of 2.09 (95%CI; 1.058-4.120, p= 0.031) was obtained. rs10802501 is present in the NLRP3 3'-UTR and could theoretically influence binding of microRNA, miR-223, which regulates NLRP3 gene expression. It is hypothesized that rs10802501 polymorphism may affect microglial IL-1beta secretion in AESD. Conclusion NLRP3 3'-UTR polymorphism may be involved in the pathogenesis of AESD.
2: おおむね順調に進展している
平成28年度計画にあるマウス大脳皮質由来の一次培養細胞を用いる実験のパイロットスタディーとしてウエスタンブロットの各種抗体の至適条件の検討を行った。サイクリックAMP濃度測定に用いるキットの選定について計画段階より更に検討が必要と思われたため文献検索などの情報収集を行なった。結果として平成28年度の研究計画全般は準備段階に留まったため、平成30年度の研究計画のうち、新たなIL1β関連遺伝的素因候補としてNLRP3の３’末端一塩基多型解析に先に着手した。その結果、けいれん重積型急性脳症の感受性多型候補を同定することが出来た。
平成28年度に準備を行った培養細胞を用いる実験を行い、合わせて平成29年度の研究計画に沿ってin vivoの実験系を構築していく。培養実験の結果が当初予測されたものでない場合は、用いる培養細胞の変更など、条件の再検討を行う。また、急性脳症と鑑別が必要な重症熱性けいれんの検体収集を進め、サイトカイン関連遺伝子素因の違いを明らかすることで、新たなけいれん重積型急性脳症特有の神経興奮毒性関連の分子の同定を試みる。
実験に使用するマウス動物大脳皮質一次培養細胞を購入する前に手持ちの培養細胞、および各種抗体を用いて、各抗至適条件の検討を行い、予想より時間を要した。。このため、入手後、速やかに処置が必要な当該細胞を昨年度には購入しなかった。また、各種抗体の一部も当初計画と異なり、購入が不要になった。サイクリックAMP測定キットについて、測定に必要な機器の変更が生じたため、研究計画の一部を次年度以降のものと差し替えた。差し替えた実験に必要な試薬類の購入価格が、一次培養細胞やサイクリックAMP測定キットより廉価であったため、次年度使用額が生じた。
前年度購入予定であったマウス動物大脳皮質一次培養細胞やサイクリックAMP測定キットを今年度に購入する。また、当初計画に新たに加わった熱性けいれん症例の遺伝子解析用の試薬購入を行う。
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J Neurol Sci
巻: 368 ページ: 272-276
10.1016/j.jns.2016.07.040.
Human Genetics
巻: 17 ページ: 369-369
10.1038/gene.2016.32
