| 研究課題/領域番号 |
16K10037
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
池田 和幸 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30507786)
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| 研究分担者 |
長船 健二 京都大学, iPS細胞研究所, 教授 (80502947)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 川崎病 / iPS細胞 / ガンマグロブリン不応 / 血管内皮細胞 |
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| 研究実績の概要 |
①主成分分析（Principal component analysis：PCA）を用いたIVIG不応およびIVIG反応川崎病患者iPS細胞由来血管内皮細胞の遺伝子発現プロファイルの比較～主成分分析とは、多くの変数を持つデータに対して、より少ない変数に縮約することにより、データの特徴をより際立たせる方法である。IVIG不応川崎病群、IVIG反応川崎病群、健常対照群の各iPS細胞由来血管内皮細胞（iPSC-ECs）を用いてRNA-sequencing (RNA-seq) 解析を行ったところ、3群とも独立した遺伝子発現分布を示した。
②川崎病IVIG不応に関連した病態関連候補分子としてのCXCL12～IVIG不応川崎病群、IVIG反応川崎病群、健常対照群の各iPSC-ECsの特徴を解析する目的で、RNA-seq データを用いてgene ontology (GO) 解析を行った。IVIG不応川崎病群とIVIG反応川崎病群の比較、およびIVIG不応川崎病群と健常対照群の比較解析において、CXCL12が有意な発現変動遺伝子として抽出された。
③Gene Set Enrichment Analysis (GSEA)を用いたIVIG不応川崎病の病態関連遺伝子セットの抽出～GSEAとは、今回行ったRNA-sequencing解析の結果に最も近い、過去のマイクロアレイデータ（あるいはRNA-sequencingデータ）をデータベースから探し出す解析方法である。IVIG不応川崎病群、IVIG反応川崎病群、健常対照群の各iPSC-ECsのRNA-seqデータを用いてGSEAを行ったところ、IVIG不応川崎病群において、IL-6関連遺伝子群の発現が有意に上昇した。
今回行った解析では、乳癌、NRAS（RAS oncogeneファミリーの一つ）、子宮頸癌に関連した遺伝子群の発現が上昇していた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
平成30年4月に、同僚の医師が突然退職されたため、循環器グループのチーフを急遽行うこととなりました。そのため、臨床に対するエフォートが急激に増加したため、研究遂行がやや遅れることとなりました。
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| 今後の研究の推進方策 |
当科循環器グループの大学院生が２年生となり、ベッドフリーとなったため、我々の研究を力強く推進、遂行してくれるものと考えている。また、川崎病グループの特定専攻医１名が、同じく臨床側のdutyが少し減少したため、本研究へのエフォートが増加する予定である。
具体的な研究計画としては、IVIG不応病態関連候補分子のin vivoでの検証を計画している。今回発見した病態関連候補分子CxCL12の遺伝子改変マウス(トランスジェニックマウス、ノックアウトマウス)を作製し、川崎病血管炎の病態を模倣するか否かを検討する。IVIG病態関連候補分子としては、CXCL12およびMMP-2や共培養実験系から得られる候補分子を対象とする。川崎病類似血管炎マウスモデルは既にいくつか確立されているが、当科ではカンジダ菌体抽出物(CAWS)を用いたマウスモデルを使用しており、血管炎惹起物質としてCAWSを使用する予定である。IVIG不応病態関連候補分子が、病態の増悪あるいは軽快因子となるか否かを検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
先にも述べましたが、昨年４月末に循環器グループチーフが突然退職したため、私が循環器チーフに就任したため、研究へのエフォートが大幅に低下したことにより未使用額が生じた。本年度は、大学院生が２年生となりベッドフリーとなるため、本研究の遂行補助予定であり、研究が大いに進むものと考えてる。予定していた実験計画に必要な病態関連候補分子であるCXCL12の遺伝子改変マウス(トランスジェニックマウス、ノックアウトマウス)の作成費用や、当科で実験系が確立しているCAWSマウスモデルの購入費用等に充てたい。
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