| 研究課題/領域番号 |
16K10044
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
浅野 健 日本医科大学, 医学部, 准教授 (70277490)
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| 研究分担者 |
藤田 敦士 日本医科大学, 医学部, 助教 (50366704)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 薬剤耐性 / epigenetics / methylation |
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| 研究実績の概要 |
今年は論文投稿とその査読への返事に対する追加実験を多く行っていた。論文はアメリカ・イギリスの薬理学会の学会誌にaccept, publishされた(Asano T, Narazaki H, and Fujita A. (2017) Genome-wide DNA methylation profiling of CpG islands in a morpholino anthracycline derivative-resistant leukemia cell line: p38α as a novel candidate for resistance. Pharmacology Research & Perspectives 5 (1), e00285 DOI: 10.1002/prp2.285）。査読で要求された実験数が10以上にもぼり、査読の返事の期限の2か月間はその実験に忙殺された。それ以外は方法論が確立していた部分であったので平成28年度は実験そのものは進んだ。
p38αのプロモーター領域でのメチル化の変化が少なく、新しいmethylation specific PCRのプライマーの設計・実験の繰り返しとなった。現時点では論文化した細胞株以外ではメチル化の影響はそれほど少ない可能性が示唆された。しかし、deoxycitidineにより薬剤感受性が変化する耐性細胞株が多いところからmethylation specifitc PCRで現時点でとらえられていない変化があることも考えられ、ヒストンのアセチル化の実験と並行して行う必要があると考えられた。ヒストンのアセチル化による薬剤感受性の変化は準備段階でのvorinostatを用いた実験では明らかに起きており可能性があると考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度の実験は方法論が確立していた部分であったので実験そのものは進んだ。しかし、p38αのプロモーター領域でのメチル化の変化が予想以上に少なく、新しいmethylation specific PCRのプライマーの設計・実験の繰り返しとなった。従って、ヒストンのアセチル化の実験はそれほど進んでいないのが現状である。
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| 今後の研究の推進方策 |
29年度はこれまでのメチル化の探索とヒストンのアセチル化の探索を同時並行で行い、結論を出していきたいと考えている。特に多数の細胞株を同時に培養するのはコンタミネーションの可能性が高くなるので1回のシリーズでは2-4つの細胞株で実験を行っているので手間がかかり、その点を考慮して実験を進めていく計画である。同時に発現ベクターの作成を行う。藤田助教が異動になるため、実験自体は浅野一人で行わなければならず、実験体制の変更を検討し、実行に移す予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当該年度は論文査読のための追加実験を多く行った。これらは既存のキット、試薬を使ったため、費用がその分少なくなった。
29年度はこれまでのメチル化の探索とヒストンのアセチル化の探索を同時並行で行い、結論を出していきたいと考えている。特に多数の細胞株を同時に培養するのはコンタミネーションの可能性が高くなるので1回のシリーズでは2-4つの細胞株で実験を行っているので手間がかかり、その点を考慮して実験を進めていく計画である。同時に発現ベクターの作成を行う。藤田助教が異動になるため、実験自体は浅野一人で行わなければならず、実験体制の変更を模索中である。
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| 次年度使用額の使用計画 |
signal tranductionの実験系の構築に加えて、28年度のメチル化の検索とヒストンアセチル化の検索も遅れを取り戻すべく精力的に行う
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