| 研究課題/領域番号 |
16K10076
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
関根 佳織 東海大学, 医学部, 講師 (70408011)
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| 研究分担者 |
増田 治史 東海大学, 医学部, 准教授 (50278496)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 心不全 / 血管内皮前駆細胞 / QQ培養 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、心臓組織再構築における血管形成の問題を解決する為に、血管内皮前駆細胞を含む再生環境調節細胞群のシート移植を行い、重症心不全への治療法を確立する。Lewisラット心筋炎後心不全モデルを作製し、ラット末梢血単核球を無血清培地生体外増幅培養法（quantity and quality control culture; QQ 培養）にて培養した（細胞環境調節細胞群）。さらに、線維芽細胞と共培養し、細胞シートを作製、移植による有効性を検討する。
2016年度は、ラットQQ細胞の確立を目指した（ヒト・マウスのみ確立）。ラット単核球をQQ培養し、フローサイトメトリーを用いて有効性を検討した。その結果、１）血管再生を促すCD34かつKDR陽性細胞が増加した。２）抗炎症性M2型マクロファージのパラメーター(CD206かつCD68陽性細胞)が増加した。３）制御性Tリンパ球サブセットの上昇（CD3、CD4かつCD25陽性）を認めた。上記結果より、抗炎症・抗線維化作用、および免疫寛容作用による心室筋線維化抑制と心機能の改善・左室リモデリング抑制効果が期待される。
2017年度は、心不全ラットへの細胞シート移植実験を検討した。心不全ラット（Lewis）にGFP-Tg SDラット線維芽細胞とLewisラットQQ細胞シートを移植したが、拒絶反応が強く死亡率8割であった。そのため、LewisラットQQ細胞を静脈投与し（Lewis→Lewis）、その効果を検討した。左室圧容積評価では、コントロール群と比較し、コンプライアンス・駆出率が良好で、拡張末期圧も低い傾向にあった。心臓組織のPCR解析ではM２マクロファージの増加を認めた。組織評価では、線維化の低下・血管数の増加傾向を認めた。以上の結果から、2018年度はLewisラットQQ細胞と線維芽細胞を共培養した細胞シートで検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
異種由来の細胞シートに対する拒絶反応が予想以上に強く、モデルラットの死亡率が高率であった。そのため、2016～2017年度は、同種で静脈投与による細胞移植効果の検討し、細胞シートの同種移植の予備実験を行ったことから、本来の計画よりやや遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
ラットQQ細胞の確立について、フローサイトメトリー解析により、血管再生、抗炎症・抗線維化作用、免疫寛容作用などの特徴をもつ可能性が示された。また、QQ細胞静脈投与群に関して、心臓組織のPCR解析では、抗炎症作用のあるM２マクロファージの増加を認め、組織評価では、血管数の増加傾向を認めた。
SDラット線維芽細胞LewisラットQQ細胞シートでは拒絶反応が強く、死亡率が高かった。
そのため、本年度は、Lewisラット線維芽細胞とQQ細胞を用いて細胞シートを作製し（同種移植）、その効果について検討していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞シート移植実験が予定通りに進行せず、静脈投与実験を先行したため、使用動物数、消耗品の差が生じた。次年度以降は同種細胞シート移植を検討する。
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