| 研究課題/領域番号 |
16K10079
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
大橋 隆治 日本医科大学, 医学部, 准教授 (00328783)
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| 研究分担者 |
深澤 隆治 日本医科大学, 医学部, 講師 (80277566)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 川崎病 / 血管炎 / エクソソーム / マクロファージ |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ヒト川崎病に類似した血管炎像を呈するCandida albicans water soluble -induced (CAWS) 血管炎マウスモデル、およびヒト川崎病患者の血清や尿を利用し、血管炎発生におけるエクソソームおよびそれに関連する免疫応答のメカニズムを解明するものである。実績：① 昨年度に引き続き、分担研究者の深澤が以前作成したCandida albicans water soluble -induced (CAWS) 血管炎マウスモデル、およびコントロール群の心臓のパラフィン固定標本を各10匹分づつ使用し、血管炎におけるエクソソーム関連蛋白の同定を試みた。また、各種炎症細胞（リンパ球、好中球、組織球）の動態について形態学的解析を施行した。さらに、エクソソーム、DNAの同定のため、in situ hybridization を行った。② マウス血清中のエクソソーム分画とそれ以外の分画からそれぞれmiRNAの抽出を試みた。10匹を１つの検体として、コントロール群と血管炎活動期群からmiRNA抽出を行い、miRNA Ready-to-Use PCR,Mouse&Rat panel I+II(Exiqon)を用いてReal time-PCRに基づくmiRNAの網羅的解析を試みた。③ 本年度からは、これらの動物実験に加え、新にヒト川崎病患者の冠動脈標本を入手し、その組織学評価、免疫学的動態の解析を試みた。特に、M1/M2 マクロファージのマーカーであるCD68,CD86,CD133,iNOS,MHC-classIIなどの抗体を染色することによりマクロファージの形質分析を試みたところ、ヒト血管炎では、M1/M2マクロファージのマーカーのうち、M2陽性細胞の有意な増加を認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
①CAWS 投与によりマウス血管炎作成を施行したが、個体ごとに病変程度にかなりばらつきがあり、CAWS を再度作成し、予備実験から血管炎モデル作成を行う必要が生じた。
②in situ hybridization を行ったが、予想通りの結果がでず、条件を変えるなど、かなりの時間を要した。
③血清からのエクソソーム分画とそれ以外の分画からのmiRNAが微量で品質検定に手間取り、網羅的解析を行う予定であった心組織、尿からのmiRNAの検出までに至らなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
①追加でCAWSモデルマウスを作製し、組織、尿からmiRNAを抽出し、血清と同様にmiRNAの網羅的解析を行う。血清中のエクソソーム分画とそれ以外、心組織、尿を比較し、血管炎発症に関わるmiRNAの同定を行う。
②同定されたmiRNAについて、CAWSモデルマウス惹起後の変化の確認を行う。
③他施設からの協力を得て、ヒト川崎病患者の冠動脈生検検体の症例を増やし、マクロファージなどの免疫系細胞の動態を解明すべく、免疫染色を中心とした組織学的解析を継続して行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
理由:血管炎作成に手間取り、血清からのエクソソーム分画とそれ以外の分画からのmiRNAが十分な量、得られず、その後予定されていた実験が施行できなかった。使用計画:新たなCAWSモデルマウスの作製、心臓、血清、尿検体を用いた、より高品質なmiRNAの摘出。エクソソーム分画とそれ以外のmiRNAと炎症活動期のmiRNAの網羅的解析、ヒト血管炎の検体を使用した形態学的解析などに使用する予定である。
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