研究課題/領域番号 |
16K10172
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研究機関 | 自治医科大学 |
研究代表者 |
小宮根 真弓 自治医科大学, 医学部, 准教授 (00282632)
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研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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キーワード | IL-33 / 表皮細胞 / 有棘層 / トランスジェニックマウス / 皮膚炎 |
研究実績の概要 |
インボルクリンプロモーター下にマウスIL-33を発現するベクターを構築した。まず、正常ヒトケラチノサイト、HaCaT細胞およびHEK293細胞にベクターをトランスフェクトし、IL-33発現をウェスタンブロットにて確認した。トランスジェニックマウス作成は外注にて施行した。まず、Balb/cマウス受精卵200個に発現ベクタ―をインジェクションし、マウス卵管内に移植した。仔マウスが得られなかったため、さらにB6マウスの受精卵200個に発現ベクターをインジェクションし、B6マウス卵管内に移植したところ、B6マウスの仔マウスが29匹得られたため、尾の組織からDNAを抽出してタイピングを行った。 29匹のファウンダーマウス(F0)うちIL-33トランスジェニックマウスは6匹ですべて成長過程で死亡した。繁殖可能週齢まで成長したマウスは21匹ですべて野生型であった。死亡したIL-33トランスジェニックマウス皮膚から切片を作成して、IL-33抗体にて免疫染色したところ、有棘層に発現を認めた。また、死亡したIL-33トランスジェニックマウスおよび野生型マウスの各臓器からRNAを抽出してIL-33発現を検討したところ、トランスジェニックマウスの皮膚で高い発現を認めたことから、インボルクリンプロモーター下に予想通りIL-33が強制発現されているものと考えられた。さらに、1週、2週、4週と、週齢が進むにしたがって皮膚におけるIL-33発現が上昇することが確認された。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
保有しているIL-33ノックアウトマウスがBalb/cであるため、トランスジェニックマウスもBalb/cで作成したかったが、Balb/cでは仔マウスが得られなかった。次にB6マウスで試したところ、仔マウスが得られたが、トランスジェニックマウスはすべて成長過程で死亡し、繁殖できず、交配ができなかった。
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今後の研究の推進方策 |
①今後、もう少しB6マウスでトランスジェニックマウス作成を試みる。外注ではなく、自施設の実験動物センターにて作成をすることで、成長過程においても詳細に検討できるようにする予定である。 ②また、IL-33の有棘層での発現が致死的である可能性を考慮し、成長後に発現誘導できるシステムを構築することを計画している。
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次年度使用額が生じた理由 |
トランスジェニックマウスが計画した通りに作出できなかったため、研究計画に遅れが生じたため。
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次年度使用額の使用計画 |
来年度に、トランスジェニックマウスの作成方法について変更を加えて再度トランスジェニックマウスの作出を試みるために、次年度分を使用する。
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