| 研究課題/領域番号 |
16K10231
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
山中 創 京都大学, 霊長類研究所, 特定研究員 (10415573)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 霊長類 / セロトニン / うつ病 / リポポリサッカライド |
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| 研究実績の概要 |
本研究は側坐核・腹側淡蒼球におけるセロトニン1Bレセプターがうつ病の病因があるとういう「セロトニン1Bレセプター仮説」を検証することが最終目標である。平成3１年度は行動評価系のスクロース嗜好性テスト（SPT）を一日で3濃度（0、0.25、1.0％）が実施できるシステムを用いたデータを基に解析をさらに進めた。近交系（inbred）のげっ歯類と異なり、個体差の大きいクローズドコロニー（outbred）の霊長類を対象とすることから、スクロース濃度依存性変化パターンを示す個体をスクリーニングする手法を採用した。簡潔に述べると、スクロース濃度により飲水量が変わることに着目し、その違いをパターン化して捉え評価した。その結果、0.1 mg/kgの低用量LPS投与のスクロース水摂取量において、７頭中３頭、0.3 mg/kgの高用量LPSでは５頭の候補個体が同定された。低下率の範囲は-13%から-91%にまで及んだ。%Preferenceは投与用量別に４頭、２頭の候補が存在したが数％の低下にとどまっていた。個体別に用量・スクロース濃度ごとの変化をみることでスクロース水摂取量に低下作用を示す候補個体及び条件を見つけることができたが、%Preference指標へのLPSの明確な影響は認められなかった。また、ウイルスベクターによる遺伝子導入実験における実験環境を整えるともにウイルス投与実験のテストを実施し、MR撮像による導入時の炎症状態モニタリングの可能性を検証した。T2強調画像とFLAIRの２つが炎症状態を生存中にモニタリング可能な撮像方法である可能性が見出された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
SPTに最も適した提示順序でのリポポリサッカライド（LPS）を用いた評価を行い、個体ごとの反応変化パターンに焦点を絞ったデータ解析を進めた。LPSは２用量がテストされ、０．２５％スクロース水で高い低下率を示し、１％スクロース水でその低下率が抑えられる（スクロース濃度依存性）変化パターンを示す個体を選び出す手法を用いた。0.1 mg/kgの低用量LPS投与のスクロース水摂取量において、７頭中３頭の個体がスクロース濃度依存性変化パターンを示した。一方、高用量の0.3 mg/kg LPSのスクロース水摂取量では５頭の個体がスクロース濃度依存性変化パターンを示した。%Preferenceにおいては、この変化パターンを示したのは、低用量で４頭、高用量で２頭であったが、数％の低下率にとどまっていた。スクロース水摂取量への影響は強いものであったが%Preferenceには弱く、高い反応性を示した個体でも－８８％の摂取量低下があったにもかかわらず%Preferenceは-6%にとどまるという結果であった。
ウイルスによる遺伝子導入実験において、対象領域の物理的な障害に由来する炎症に起因した行動変化を間違って捉えることを避ける必要性があり、実験実施中の生きたままの状態でモニタリングできることが重要である。その可能性を明確にするために、ウイルス投与後に起きる炎症を含めた病変を捉えるMR撮像を検討した結果、ウイルス注入直後には検出されなかった高信号が導入遺伝子の発現により惹起された。このようなことからT2強調画像とFLAIRが炎症病変のモニタリングに適用可能であると考えられた。
SPTにおけるLPSモデルの評価は進捗し、遺伝子導入実験におけるモニタリングシステムを構築したものの、他の行動指標の評価法や関連分子特異的な局所発現導入実験が遅れていることから、全体として研究が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度は以下の研究計画を重点的に推し進める。
まず、うつ病様行動の質を重視した解析法の確立を目指す。具体的には、活動量ではなく抑うつ的な行動であるhuddlingの出現頻度の数値化を試みる。ビデオ観察を主に用い、現存のケージにおいて最適な録画方法を検討し、簡便な評価可能システムを構築するためにうつ状態を惹起する薬物であるレセルピンやLPSを投与しこの行動をスコアリング化する。次に、活動量に関しては異動前の施設に備え付けられた動画活動量計測システムが現施設では設置されていないことから、より安価な活動計を手に入れて代用するように変更する。摂餌量の測定は飼育ケージで行う必要があり、落とした餌の由来を特定可能にするためにケージ毎の仕切りを作製する。ウイルスベクターによる遺伝子導入方法に目処が立ったことから、正確に効率よく標的領域である側坐核・腹側淡蒼球にウイルスベクターを注入する技術を確かなものとし、局所的な関連分子の発現調節法を実施する。使用するベクターを作製および譲渡を依頼し導入を実施する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
異動に伴い研究環境や職種が変化した為に計画時の執行金額やエフォート率に差異が生じたために延長した。主に、実験機器を変更する上で時間や選定に時間を費やし、加えて効率的なエフォート割合に準じた実験の実施を行わなければならなかったことに起因する。しかし、研究計画に関しては大きな変更はないので、申請時の予定通り研究内容を進めていく。
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