アミノ酸トランスポーターSLC７A1を標的とした大腸癌CAR-T療法の開発

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K10476
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 坂本 一博 順天堂大学, 医学部, 教授 (60205763)
• 研究分担者: 小見山 博光 順天堂大学, 医学部, 非常勤講師 (30348982) ; 神山 博彦 順天堂大学, 医学部, 助教 (00365595)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: イオントランスポーター / SLC7A1 / モノクローナル抗体 / 抗体医薬 / 大腸癌 / 膜分子

研究実績の概要

本研究は、大腸癌患者検体において癌特異的に高頻度で発現亢進している陽イオントランスポーター(SLC７A1)を標的とした新たな治療法（CAR-T療法）開発を目的とする．
申請者らは大腸癌組織特異的に高発現の遺伝子を探索し，複数の膜遺伝子を特定した．本年度までの研究で，14回膜貫通型の分子SLC７A1が、大腸癌組織において発現頻度・発現レベルとも高いことを確認した，さらにこの遺伝子に対するsiRNA処理により大腸癌細胞株の増殖が阻害されたことを確認し．この膜分子が癌細胞の増殖に関与していると推測した．一般にSLC７A1のような，多回膜貫通型の分子に対する抗体作成は難しいとされるが、申請者らは抗SLC７A1抗体株細胞の作成，選抜を行い研究を進めている．
本研究によって，既存の治療には抵抗を示している多くの大腸癌もしくは，再発大腸癌に対する新たな治療法開発を可能にすることを目指す．

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

一般にSLC７A1のような，多回膜貫通型の分子に対する抗体作成は難しいとされるが、申請者らは抗SLC７A1抗体株細胞の作成，選抜を行っている．本研究ではまずSLC7A1のがん増殖における機能を確認，つぎに複数の抗SLC7A1モノクローナル抗体の作成，精製，取得を行った．さらにSLC7A1高発現の細胞を用い取得抗体の結合性等の性質を評価した．その結果抗体が抗原である膜分子SLC7A1に対し特異性が高くかつ高結合活性を呈することを確認した．一方これらの抗体を用いて様々な大腸癌細胞に対する結合活性を評価するなど計画どおり研究は進んでいる．
以上から当研究の進展は概ね順調であると考えている．

今後の研究の推進方策

抗SLC7A1モノクローナル結合活性の評価と，この膜分子の発現動態の解析を進める．取得したモノクローナル抗体を用いて臨床組織検体に対し免疫染色を行うことにより，大腸癌組織においてSLC7A1が特異的な高発現を示すことを確認すると共に，取得抗体によるがん診断，特性の評価への応用性を検証する．さらに取得抗体を用いた大腸癌株細胞に対する抗体依存性細胞傷害活性を評価し，抗SLC7A1抗体の標的治療薬としての臨床応用可能性を検討する．

次年度使用額が生じた理由

研究計画の実施が前後したこと，また，一部の実験・作業を既存機器などを利用して行うことが可能であったために，予定していた一部の機器・試薬類のうち、購入を先送りしたものがある．またデーター解析について，今年度はアルバイトを雇用することなく研究代表者・分担者にて進めたため，人件費が発生しなかったことなどから、次年度使用額が生じた．
H30年度はデーターが蓄積し解析のために人員を要することなどから，アルバイトの雇用が必要である．また現存の試薬・器具では不足が生じており，次年度には新たに実験資材をを購入する予定である．このほか，受託分析などに使用の予定である．なお本研究で得られた研究成果を公表するとともに，関連研究における最新情報を取得するため、学会出席を予定しており出張旅費を計上している．

研究成果

• [雑誌論文] Plasminogen activator inhibitor-1 regulates macrophage-dependent postoperative adhesion by enhancing EGF-HER1 signaling in mice. (2018)
  • 著者名/発表者名: Honjo K, Munakata S, Tashiro Y, Salama Y, Shimazu H, Eiamboonsert S, Dhahri D, Ichimura A, Dan T, Miyata T, Takeda K, Sakamoto K, Hattori K, Heissig B:
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 31 ページ: 2625-2637
  • DOI: 10.1096/fj.201600871RR
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neutrophil-lymphocyte ratio as a prognostic factor in incurable stage IV colorectal cancer. (2018)
  • 著者名/発表者名: Munakata S, Sugimoto K, Honjo K, Kawai M, Kawano S, Kamiyama H, Ouchi M, Takahashi M, Yuichi Tomiki Y, Sakamoto K.
  • 雑誌名: .Open Journal of Gastroenterology 巻: 8(2) ページ: 45-56
  • DOI: 10.4236/ojgas.2018.82005
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Repeated laparoscopic resection of extra-regional lymph node metastasis after laparoscopic radical resection for rectal cancer. (2018)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto K, Takahashi M, Takahashi R, Kawano S, Kawai M, Sugimoto K, Kamiyama H, Kojima Y, Okuzawa A, Tomiki Y.
  • 雑誌名: Journal of minimal access surgery 巻: 14(2） ページ: 146-168
  • DOI: 10.4103/jmas.JMAS_177_17
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Pharmacological targeting of neutrophil serine proteases prevents lethality in dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice (2018)
  • 著者名/発表者名: Ro H, Munakata S, Ueyama T, Komiyama H, Takahashi M, Kojima Y, Tomiki Y, Sakamoto K
  • 雑誌名: Journal of Gastrointestinal & Digestive System 巻: 8 ページ: --
  • DOI: 10.4172/2161-069X.1000551
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Survival benefit of lymph node dissection in surgery for colon cancer in elderly patients: A multicenter propensity score-matched study in Japan. (2018)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Niitsu H, Sakamoto K, Hinoi T, Hattori M, Goto M, Bando H, Hazama S, Maeda K, Okita K, Horie H, Watanabe M; Japan Society of Laparoscopic Colorectal Surgery
  • 雑誌名: Asian J Endosc Surg. 巻: -- ページ: --
  • DOI: 10.1111/ases.12474.
  • 査読あり
• [雑誌論文] High-sensitivity detection of micrometastases generated by GFP lentivirus-transduced organoidscultured from a patient-derived colon tumor (2018)
  • 著者名/発表者名: Okazawa Y, Mizukoshi K, Koyama Y, Okubo S, Komiyama H, Kojima Y, Goto M, Habu S, Hino O,Sakamoto K, Orimo A.
  • 雑誌名: Journal of Visualized Experiments（JoVE） in press 巻: -- ページ: --
  • 査読あり
• [雑誌論文] Minimally invasive surgery for colorectal cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto K, Tsukamoto R, Kawano S, Kawai M, Niwa K, Ishiyama S, Sugimoto K, Kamiyama H, Komiyama H, Takahashi M, Kojima Y, Goto M, Okuzawa A, Tomiki Y
  • 雑誌名: Juntendo Medical Journal 巻: 63(5) ページ: 384-392
  • DOI: 10.14789/jmj.63.384
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Propensity score analysis in the comparison of long-term outcomes for locally advanced colon cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Sugimoto K, Sakamoto K, Ichikawa R, Kure K, Honjo K, Ro H, Takahashi R, Kawano, Niwa K, Ishiyama S, Kamiyama H, Komiyama H, Takahashi M, Kojima Y, Goto M, Okuzawa A, Ishibiki Y, Tomiki Y
  • 雑誌名: Juntendo Medical Journal 巻: 63(4) ページ: 246-272
  • DOI: 10.14789/jmj.63.264
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Salivary chromogranin a as a psychosomatic stress marker is suppressed in laparoscopic surgery compared with open surgery for colon cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishiyama S, Sakamoto K, Kamiyama H, Niwa K, Sugimoto K, Takahashi M, KojimaY, Goto M, Okuzawa A, Tomiki Y:
  • 雑誌名: Juntendo Medical Journal 巻: 63 ページ: 88-94
  • DOI: 10.14789/jmj.63.88
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Superior mesenteric artery syndrome improved by enteral nutritional therapy according to the ｃontrolling nuritional status score. (2017)
  • 著者名/発表者名: Takehara K, Sakamoto K, Takahashi R, Kawai M, Kawano S, Munakata S, Sugimoto K, Takahashi M, Kojima Y, Fukunaga T, Kajiyama Y, Kawasaki S:
  • 雑誌名: Case Reports in Gastroenterology 巻: 11(3) ページ: 721-727
  • DOI: 10.1159/000484129
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Advanced techniques in the minimal invasive surgery for colorectal cancer -the cutting edge in the quarter century (2017)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto K:
  • 学会等名: the, IASGO-CME 2017, Tokyo
  • 国際学会
• [学会発表] Discoidin domain receptor-1 (DDR1) is an independent prognostic marker of poor prognosis in ESCC. (2017)
  • 著者名/発表者名: Sugimoto K, Tomoaki Ito, Orita H, Sato K, Sakamoto K, Sakurada M, Kushida T, Maekawa H, Tully E, Woo J Gabrielson E
  • 学会等名: 110th AACR, Washington DC
  • 国際学会
• [学会発表] Postoperative adjuvant chemotherapy improves survival in stage II colon cancer ? a propensity score matching analysis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto R, Matsuzawa M, Hagiwara T, Tsuchiya Y, Amemiya K, Motegi S, Makino Y, Kawano S, Honjo K, Kure K, Ichikawa R, Ro H, Ito S, Takahashi R, Niwa K, Ishiyama S, Sugimoto K, Kamiyama H, Takahashi M, Kojima Y, Goto M, Okuzawa A, Tomiki Y, Fukunaga T, Kajiyama Y, Kawasaki S, Sakamoto K
  • 学会等名: 110th AACR, Washington DC
  • 国際学会
• [学会発表] The prognostic capability of oxidative stress after surgery in colorectal cancer (2017)
  • 著者名/発表者名: Sugimoto K, Tsuchiya H, Hagiwara T, Matsuzawa H, Makino Y, Motegi S, Tsukamoto R, Kawai M, Kawano S, Niwa K, Ishiyama S, Kamiyama H, Takahashi M, Kojima Y, Tomiki Y, Sakamoto K
  • 学会等名: The 21th Asian Congress of Surgery, Tokyo,
  • 国際学会
• [学会発表] Production of monoclonal antibodies against amino acid transporter SLC7A1 to develop novel therapy for colorectal cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Fukaya M, Komiyama H, Sugimoto K, Kamiyama H, Sakamoto K
  • 学会等名: 第76回日本癌学会学術総会, 横浜,
• [学会発表] Identification of a novel diagnostic marker for colon cancer through comprehensive microRNA analysis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto R, Komiyama H, Hosoya M, Kure K, Okazawa Y, Mizukoshi K, Fukaya M, Sugimoto K, Kamiyama H, Tomiki Y, Sakamoto K:
  • 学会等名: 第76回日本癌学会学術総会, 横浜
• [備考] 消化器外科学講座（下部消化管外科学）
  • URL: http://www.juntendo.ac.jp/graduate/laboratory/labo/kabusyoukakan/