| 研究課題/領域番号 |
16K10517
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
石橋 由朗 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (00246373)
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| 研究分担者 |
志田 敦男 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (00338906)
高田 耕司 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (30179452)
松本 晶 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (20366272)
田中 雄二朗 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (90408419)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | SENP-1 / 食道癌 / SUMO-1 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、最近癌との関連が指摘されている SUMO 化修飾に着目し、その中でも基質（標的蛋白質）からのSUMO脱修飾に関与するSUMO特異的プロテアーゼの一つであるSUMO-specific protease 1(SENP1)の食道癌における意義を検証すること目的としている。本年度は以下の成果を認めた。
1．食道癌培養細胞、正常ヒト食道上皮細胞での発現の検討：抗Anti-SENP-1抗体(EPR3844 Abcam、PA5-11327 Invitrogen）を用いて、各種食道癌培養細胞（KYSE50、KYSE70、KYSE150、KYSE170、KYSE510）と正常ヒト食道上皮細胞（HEsEpiC）においてSENP-1蛋白の発現のウエスタンブロット分析を行った。食道癌細胞は、いずれも正常食道上皮細胞に比べ、SENP-1発現が増加していた。食道癌では低分化型のKYSE70での発現が最も多く認められたがその他の癌細胞では分化度での発現に大きな差は認めなかった。
2．牛胎児血清（FCS）濃度変化の食道癌培養細胞の増殖へ影響とSENP-1発現の検討：同様の各種食道癌培養細胞において3種類のFCS濃度（10%、1%、0.1%）で培養を行い10日後の増殖状態を検討した。KYSE50、KYSE150はFCS濃度0.1%で細胞死を認め、その他は増殖速度が低下した。細胞死しなかった細胞では、KYSE170ではFCS濃度が下がるほどSENP-1蛋白発現が増加する傾向が認められ、増殖因子とSENP-1との何らかの関連が示唆された。
3．食道癌手術症例での免疫組織化学的検討：食道扁平上皮癌手術症例での抗Anti-SENP-1抗体を用いた免疫組織染色を行った。SENP-1の発現は、主に食道癌の細胞質に認められたが、染色強度は低かった。染色方法、条件設定をさらに検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度の当初の予定からやや遅れていると判断した理由は以下のものである。
1.免疫組織化学染色の染色手法確立の遅れ:当初文献上前立腺癌手術患者のホルマリン固定、パラフィン包埋切片を用いて報告されていた手法を踏襲し、使用されたものと全く同一の抗Anti-SENP-1抗体、染色手順を用いて染色を行ったが、十分な染色性が確認されなかった。抗体がpolyclonal抗体であったことからロットナンバーの違いが染色性に影響している可能性が考えられた。そのためいくつかの異なった抗Anti-SENP-1抗体を購入し、染色手順、染色条件を含め検討を行った経緯があり、予定より若干の遅れが発生している。
2.研究代表者の所属研究機関内での人事異動：研究代表者の学内での所属について人事異動が発生したことにより、一時的に代表者が担当していた研究内容の実施が予定通り遂行できない期間があった。
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| 今後の研究の推進方策 |
本研究は、以下の予定をもって推進していく予定である。
1．siRNA による SENP-1遺伝子の発現阻害の検討
食道癌細胞株 に、SENP-1遺伝子の発現阻害のために合成した siRNA を導入する。 SENP-1 遺伝子発現阻害効果をノーザンブロティング、抗 SENP-1抗体を用いたイムノブロットにて確認する。食道癌においてSENP-1遺伝子の発現阻害が抗癌作用をもたらすか抗増殖作用等の検討を行う。
2.SENP-1発現の免疫組織学的検討
食道癌手術患者の摘出標本のホルマリン固定、パラフィン包埋切片を用いて、SENP-1発現と臨床病理学的因子や予後との関連を検討し、SENP-1発現の食道癌における意義を検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）本年度は免疫組織化学染色の染色手法確立が難渋し、研究の進行に若干の遅れが発生した事情があり、当初計画していた研究が実施できなかったため次年度使用額が発生した。また研究代表者の所属研究機関内での人事異動が発生したことにより、一時的に代表者が担当していた研究内容の実施が予定通り遂行できなかった。
（使用計画）食道癌手術症例のSENP-1発現について食道癌患者から採取したホルマリン固定、パラフィン包埋された病理検体を用いて、免疫組織学的にSENP1の発現を確認し臨床病理学的因子や予後との関連を検討する。またSENP-1発現抑制の食道癌細胞への影響について、食道癌細胞株（KYSE110,KYSE70,KYSE50,KYSE30等）でsiRNAを用いたSENP-1発現抑制の影響（増殖能等）を確認する。
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