| 研究課題/領域番号 |
16K10558
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| 研究機関 | 公益財団法人佐々木研究所 |
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研究代表者 |
関谷 剛男 公益財団法人佐々木研究所, 附属研究所, 研究所所長(移行) (70142651)
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| 研究分担者 |
中村 幸男 信州大学, 医学部附属病院, その他 (00549488)
藤井 智明 公益財団法人佐々木研究所, 附属研究所, 部長(移行) (10511420)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | ヒト大腸癌 / がん転移 / 間質細胞 / ゼブラフィッシュ / 転移抑制促進遺伝子 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ゼブラフィッシュを用いた大腸癌転移モデルとトランスポゾンを用いた挿入変異導入系を用いて、間質細胞における大腸癌転移促進・抑制遺伝子の同定および機能解析を行い、間質細胞の大腸癌転移における役割およびそのメカニズムを明らかにすることを目的とする。昨年度まで、癌細胞の生体内での転移をモニターするために必要な蛍光タンパク質を発現する大腸癌細胞を樹立した。本年度はトランポゾンを用いた挿入変異導入系を利用して、間質細胞のゲノムDNAに機能欠損型変異および機能活性化型変異を導入できるゼブラフィッシュを作製するためのベクターの作製を行った。まず、トランスポゾンを全身で発現するベクターと目的の個体を選別するために全身で赤色蛍光タンパク質を発現するベクターを分譲してもらった。そして、全身で赤色蛍光タンパク質を発現するベクターを眼特異的に赤色蛍光タンパク質を発現させるために、全身で遺伝子を発現させるプロモーターを眼特異的に遺伝子を発現させるプロモーターに入れ替えた。さらに、全身でトランスポザーゼを発現するプラスミドを分譲してもらい、トランスポザーゼを造血幹・前駆細胞に発現させるために、全身で遺伝子を発現させるプロモーターを造血幹・前駆細胞特異的に遺伝子を発現させるプロモーターに入れ替えたプラスミドベクターを作製した。来年度以降は、これらのプラスミドを用いて目的のゼブラフィッシュの作製および大腸癌細胞株とゼブラフィッシュを用いた大腸癌転移モデルの作製を行っていく。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度の５月にゼブラフィッシュの飼育施設が整備された。ゼブラフィッシュの導入やゼブラフィッシュ系統の入れ替えなどを行い、最近、産卵が見られるようになった。そのため、目的の遺伝子を持つトランスジェニック個体の作製に着手できていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
目的の遺伝子を持つゼブラフィッシュの作製および大腸癌細胞株とゼブラフィッシュを用いた大腸癌転移モデルの作製を行っていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
理由
本年度の５月にゼブラフィッシュの飼育施設が整備されたが、当初十分な産卵が見られなかった。そのため、目的の遺伝子を持つトランスジェニック個体の作製に着手できていない。
使用計画
次年度以降は、目的の遺伝子を持つトランスジェニック個体および大腸癌細胞株とゼブラフィッシュを用いた大腸癌転移モデルの作製のための予算として使用していく。
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