| 研究課題/領域番号 |
16K10644
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| 研究機関 | 大阪医科大学 |
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研究代表者 |
神吉 佐智子 大阪医科大学, 医学部, 助教 (40411350)
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| 研究分担者 |
渡邊 房男 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (40183719)
三重野 繁敏 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (10411373)
福原 慎二 大阪医科大学, 医学部, 助教 (70764984)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 組織特異的ペプチド / 虚血 |
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| 研究実績の概要 |
虚血心筋組織に特異的に集積するペプチドが、どのような機序で組織特異性を発揮するのかを明らかにする方法として、培養細胞系を用いることとし、これまでの研究では in vitroで虚血状態を再現する方法を模索した。培養細胞H9c2を用いた虚血条件では、当該ペプチドの取り込みが確認できなかったため、ペプチドと受容体タンパク質候補との相互作用 protein-protein interactionを確認する実験を行うこととし、ヒスチジンタグを付加した受容体候補タンパク質を組み込んだプラスミドを大腸菌培養系で作成した。細胞には一般的に合成タンパク質の発現が良好であるHEK293細胞を用いNucleofection法で遺伝子導入を行った。組み換えタンパク質の合成を確認するため、ヒスチジンダグによる精製を行っている。しかしタンパク量が微量のためか発現確認に時間を要している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
微量なタンパク量の検出が難しく、確認実験でかなり時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
組み換えタンパク質の発現確認後、組織特異的ペプチドの受容体候補物質の絞り込みを行い、当該物質同士の相互作用を確認する。虚血による発現メカニズムの解明を進める。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞に遺伝子を過剰発現させるためのベクターは作成できたが、その発現を確認する実験で時間を要している。このス
テップを踏まずに、次の実験ができない。前純化の方法を調整しており、早々に実現すると考える。
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