EGFRvIII特異的CAR導入免疫細胞を用いた膠芽腫治療法の開発

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K10767
• 研究機関: 奈良県立医科大学
• 研究代表者: 西村 文彦 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (70433331)
• 研究分担者: 中村 光利 奈良県立医科大学, 医学部附属病院, 研究員 (00305715)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: Glioblastoma / Immunotherapy / EGFRvIII / Chimeric antigen / Natural killer cell

研究実績の概要

本研究では悪性神経膠芽腫細胞に発現するがん変異抗原epidermal growth factor receptor variant III(EGFRvIII)に特異的なchimeric antigen receptor(CAR)遺伝子をレンチウイルスベクターを用いてヒトT細胞やnatural killer(NK)細胞に導入し、膠芽腫細胞に対する抗がん効果を評価することが目的である。当初健常者末梢血由来のNK細胞に遺伝子導入しようと試みたが、導入効率が低かったため、KHYG-1のNK cell lineを用いて、遺伝子導入を行った。導入効率を高めるために磁器ビーズを用いて、純度を高めた。EGFRvIII特異的CAR-NK(KHYG-1)を用いて、EGFRvIII発現U87細胞に対するgrowth inhibition assayを行い、腫瘍増殖抑制効果を得た。またapoptosis detection assayでも、EGFRvIII特異的CAR-KHYG-1が、EGFRvIII発現U87腫瘍細胞に対して、腫瘍抗原特異的にapoptosisを誘導することを確認した。以上の成果をANTICANCER RESEARCH 38:5049-5056(2018)に報告した。今後、抗EGFRvIII特異的CAR-T細胞や、抗EGFRvIII特異的CAR-NK細胞のサイトカイン分泌能を評価する予定である。また、EGFRvIII発現膠芽腫細胞移植NOGマウスに対する抗がん効果をin vivoで評価する。これらの知見をもとに膠芽腫に対するEGFRvIII特異的CAR発現NK細胞ならびに、γδT細胞の抗がん効果を明らかにしていく。

研究成果

• [雑誌論文] Novel human NK cell line carrying CAR targeting EGFRvIII induces antitumor effects in glioblastoma cells (2018)
  • 著者名/発表者名: Toshiharu Murakami, Tsutomu Nakazawa, Atsushi Natsume, Fumihiko Nishimura, Mitsutoshi Nakamura, Ryosuke Matsuda, Koji Omoto, Yoshitaka Tanaka, Youichi Shida, Young-Soo Park, Yasushi Motoyama, Ichiro Nakagawa, Shuichi Yamada, Kentaro Tamura, Yasuhiro Takeshima, Yoshiaki Takamura, Toshihiko Wakabayashi, Hiroyuki Nakase
  • 雑誌名: ANTICANCER RESEARCH 巻: 38 ページ: 5049-5056
  • DOI: 10.21873/anticanres.12824
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Establishment of an efficient ex-vivo expansion method for highly purified human natural killer cells and evaluation of their antitumor activity on glioblastoma (2019)
  • 著者名/発表者名: Nakazawa T, Tanaka Y, Shida Y, Nakamura M, Nishimura F, Matsuda R, Murakami T, Nakagawa I, Motoyama Y, Tsujimura T, Nakase H.
  • 学会等名: Keystone Symposia: Innate and Non-Classical Immune Cells in Cancer Immunotherapy
  • 国際学会
• [学会発表] Novel Human NK Cell Line Carrying CAR Targeting EGFRvIII Induces Antitumor Effects in Glioblastoma Cells (2019)
  • 著者名/発表者名: Murakami T, Nakazawa T, Nishimura F, Natsume A, Wakabayashi T, Nakase H
  • 学会等名: European Association for Cancer Research
  • 国際学会
• [学会発表] Novel human NK cell line carrying CAR targeting EGFRvIII induces antitumor effects in glioblastoma cells in vitro (2018)
  • 著者名/発表者名: 村上敏春、中澤務、夏目敦至、西村文彦、中村光利、松田良介、至田洋一、若林俊彦、中瀬裕之
  • 学会等名: 第19回日本分子脳神経外科学会