研究課題/領域番号 |
16K10811
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研究機関 | 東京大学 |
研究代表者 |
安野 雅統 東京大学, 医学部附属病院, 登録研究員 (10771884)
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研究分担者 |
齋藤 琢 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (30456107)
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研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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キーワード | 椎間板変性 |
研究実績の概要 |
椎間板変性を来す分子生物学的メカニズムを解明し、治療応用へと展開するための研究基板を作ることを目的としている。 マウス椎間関節を顕微鏡下で切除することにより再現性を持って椎間板変性を惹起するモデルを樹立した。本モデルの妥当性はレントゲン所見、組織学的所見をヒト椎間板変性と比較することで行った。正常マウス、およびこのモデルを施行したマウスの術後2週の髄核、線維輪組織をレーザーマイクロダイセクションの手法により採取した。採取した組織よりmRNAを抽出し、増幅、逆転写を行いcDNAを作成した。このサンプルをRNAシークエンスにかけることで各コンポーネントでの遺伝子発現を網羅的に解析し、髄核、線維輪の既知のマーカー遺伝子の発現よりサンプルの妥当性を検討し、椎間板変性の候補遺伝子を同定した。 具体的にはWTマウスの線維輪および髄核から採取、増幅したmRNAと変性を誘導した線維輪、髄核から採取、増幅したmRNAの網羅的解析を行い、発現量の変化率が10倍を越えるものを絞った。また、IPAを用いて椎間板変性における上流シグナルの探索を行った所TGFβシグナルが有意に低下していることが判明した。発現量が変性により著明に増加しており、TGFβシグナルに関与の報告のある遺伝子を候補遺伝子として同定した。実際に椎間板変性を誘導したマウス椎間板の免疫染色では、これらの候補遺伝子の蛋白質は線維輪細胞で発現が上昇しており、実験結果は妥当であったと考えられた。これら候補遺伝子のfloxマウスをとりよせ、このマウスとRosacreert2マウスを掛け合わせ、タモキシフェン投与により骨格形成後の遺伝子の機能解析を行う予定である。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
椎間板線維輪細胞の初代培養系の確立に難渋している。
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今後の研究の推進方策 |
具体的にはこの遺伝子組み換えマウスに椎間板変性モデルを作成し、KO群がコントロール群と比べて変性がどうなるかを調べる。 in vitroではfloxマウスから初代線維輪細胞を採取、培養しloss of function, gain of functionの系で機能解析を行う予定である。
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次年度使用額が生じた理由 |
(理由)順調に研究が進んでいるため、必要以上に経費をかけずに済んだ (使用計画)in vivoの解析など、次年度以降の経費のかさむ実験に使用する計画である
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