| 研究課題/領域番号 |
16K11004
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
植木 英雄 岡山大学, 医学部, 技術専門職員 (90537218)
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| 研究分担者 |
那須 保友 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (20237572)
渡邉 豊彦 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (30432644)
定平 卓也 岡山大学, 大学病院, 医員 (20733322)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 腫瘍 / 細胞検出 |
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| 研究実績の概要 |
hTERT-SGEシステムを利用した癌検出技術の適応癌種を検討するとともに、細胞ごとのトランスフェクションの最適な条件を調査した。ヒトの尿路性器癌細胞(前立腺癌, 腎癌, 精巣腫瘍)を含む癌細胞セルラインを様々な割合でプレートに播種し、作製したhTERT-SGE-GFPプラスミドをトランスフェクションして、癌細胞におけるGFPの発現を蛍光顕微鏡で経時的に観察した。この結果、調査したすべての癌種において、遺伝子発現の上昇が観察された。また、最適なトンラスフェクション条件を決定することができた。さらに、細胞をはがして、フローサイトメーターを用いて蛍光強度の測定・定量化を行った。感度、再現性について蛍光顕微鏡との比較を行い、検出至適時間についても解析を行った。これらの実験により、hTERT-SGEシステムによる体外診断法の実用化に向けた知見が得られた。
細胞のhTERT活性の違いが、hTERT-SGEシステムによる遺伝子発現の高効率化とどのような関係があるか調査することとした。このために、作製したhTERT-SGEシステムでルシフェラーゼ遺伝子が発現するプラスミドをhTERT活性の異なるさまざまな細胞に導入して、その発光強度をマイクロプレートリーダーで測定した。次に、定量的リアルタイムPCRにより測定したhTERT活性とルシフェラーゼ遺伝子の発現量の相関を調査した。この結果、hTERT活性とルシフェラーゼ遺伝子の発現量には正の相関があることが明らかとなった。これらの実験により、hTERT-SGEシステムによる癌細胞検出に関する有用性がさらに確認できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究実施計画に従っておおむね順調に進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
当該システムがテロメラーゼ活性依存的に転写することを利用して、癌細胞株の中で、テロメラーゼ活性の強さの異なる細胞を分取し、その特徴を比較解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
論文投稿に関わる費用として考えていたが、当年度中の支払いには間に合わなかったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
論文投稿を行ったので、次年度において支払う。
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