| 研究課題/領域番号 |
16K11036
|
|---|
| 研究機関 | 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究 |
|---|
研究代表者 |
伊藤 敬一 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 泌尿器科学, 准教授 (90260091)
|
|---|
| 研究分担者 |
松尾 洋孝 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 分子生体制御学, 講師 (00528292)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
|
| キーワード | 腎細胞癌 / 包括的高感度転写産物プロファイリング / バイオマーカー / 早期診断 / 病期診断 / 次世代シークエンサー / 悪性度 |
|---|
| 研究実績の概要 |
腎細胞癌には早期発見に活用できる特異的な腫瘍マーカーは存在しない。我々は包括的高感度転写産物プロファイリング(HiCEP)法という新規の方法を用い腎細胞癌の発見や病期診断に応用しうるバイオマーカーの探索を行っている。HiCEP 法は、256 対のプライマーを用いてcDNA を網羅的に増幅し、mRNA の発現量を高い感度と再現性で、低発現mRNA を含め測定可能にした技術である。この方法を用い、本研究に参加の同意が得られている6症例に対しHiCEP法を行った。この6症例は、症例1～3までは腎細胞癌の細胞学的悪性度(Fuhrman grade)が低く、リンパ節転移や遠隔転移がない症例（低悪性度群）、症例4～6は有転移症例か局所浸潤性がありgrade4と悪性度が非常に高い症例（高悪性度群）を選択した。これらの6症例で癌部と非癌部の比較を行い、癌部での発現量が非癌部と比較して1.5倍以上増加しているピークについてその後の検討を行った。低悪性度群と高悪性度群の比較において、高悪性度群で発現量の増加率が高くなっているピークを3つに絞ることができた。この3ピークは現在次世代シークエンサーによる検討で、分子の同定を試みている。次世代シークエンサーは平成28年度はテストランを繰り返し、安定的な解析結果が得られるようになっている。高悪性度群で発現の増加率が上がる分子は癌の進展に関与する可能性があり期待できる。また癌部と非癌部との発現の単純な比較において、6症例すべてで5倍以上の発現増加が得られているピークも25ピークに絞ることができており、これらのピークに関しても対応する分子の同定が進んできている。早期発見につながるバイオマーカーは低悪性度、高悪性度の症例のいずれにも共通して発現している必要があり、これらの25分子に関しては早期診断のバイオマーカーとなる候補分子であると考えている。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
6症例の患者検体に関してHiCEP法を行うことができており、また次世代シークエンサーに関しても安定的に稼働することができるようになっている。低悪性度の3症例と高悪性度（ないし有転移症例）の3症例の比較をすでに行うことができており、高悪性度群において発現の増加率の高い3つのピークをすでに同定している。この3ピークに関しては、次世代シークエンサーの結果が得られれば分子を同定することができ、その後の解析（発現解析や機能解析）に進めることができる。また6症例すべてにおいて、非癌部と比較し癌部で発現が5倍以上上昇している25ピークに関しても今後有望と考えている。これらのピークに関しても分子は同定されてきており、同定に関して問題はない。研究の進捗状況としては順調な経過と思われる。この25ピークに関しても今後検討していく。またこの6症例以外にも、癌部、非癌部のペアで検体が得られている症例（すべて本研究への同意が得られた症例）が約50症例あり、候補分子の絞り込みができれば、これらの検体でPCRなどで発現の確認を行っていく。この準備も整っている。また、今回は組織に関する検討を行ったが、同意の得られた多くの症例において、腎癌の手術前、術後1週間、術後1ヶ月の血液検体が確保できている。この血液検体に関して、白血球分画のRNAをすでに抽出している。これらの検体に関しても、今後HiCEPを予定している。この検体に関しては、患者において担癌状態、癌摘除直後、癌摘除後1ヶ月以降の白血球上の発現分子の変化をみることができる。この検討により、癌組織における分子の発現ではなく、生体における白血球の反応（分子の発現の変化）を見ることにより、新たな角度から癌発見、病期診断のバイオマーカーが発見できる可能性がある。
|
| 今後の研究の推進方策 |
現在までのところ本研究は順調に進んでいる。癌組織における検討ではHiCEP法を行った6症例すべてにおいて発現が5倍以上亢進している25のピークをすでに決定しており、分子の同定を進めてく。次世代シークエンサーも問題なく稼働することができるシステムが確立しておりこの工程には問題はない。この6症例以外の腎癌症例の癌部、非癌部のペアのcDNAもすでに確保できており、これらの検体で候補分子発現の感度、特異度および進行期別のマーカー陽性率の検討を行っていく（PCRで検討）。各患者情報もすでに収集しており、この工程にも問題はない。有望分子の局在に関して、抗体がコマーシャルベースで確保できる分子は免疫染色を行う。抗体が現時点で存在しない分子は、抗体を作成していく。有望分子は測定方法の確立(ELISAなど)を目指す。また有望分子に関しては癌細胞における生理機能の解析を行いたい。この25分子は早期発見のバイオマーカーになりうる可能性を秘めている。さらに低悪性度の腎癌と比較し、高悪性度の腎癌で発現量が上昇する3つのピークに関しても同様の検討を行っていく。この3分子は高悪性度症例において発現量が上がる分子であり、癌の進展や転移に関連する分子が同定できる可能性がある。さらに白血球上に発現する分子の変化に関しても今後はHiCEPを行い、同様の検討を行っていく。すでにcDNAは確保できており、その後の工程は組織における検討と同様で問題はないと思われる。全体的にいうと、(1)候補分子の同定の過程には問題はない。(2)また候補分子の感度、特異度および進行期別のマーカー陽性率の検討に関しても問題はない。(3)候補分子の効率的な測定方法の確立、腫瘍マーカーとしての候補分子の局在や生理機能の解析に関しても、分子生体制御学講座においては十分な経験を有しており、難しい工程も進めていくことができると考えている。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
平成28年度の所要額はほぼ使用しているが、全体の約3%を繰り越しとする。これは必要な物品を購入すると所要額を超えてしまうためであり、この金額は次年度に繰り越し、有効に使用したい。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
平成28年度の予定金額の3%以下であり、使用に関しては問題はないものと思われる。必要な物品はある程度高額なものが多いため、この繰り越した研究費は平成29年度の研究の物品費として使用することを予定している。
|
| 備考 |
放射線医学総合研究所、研究基盤センターの遺伝子・細胞情報研究開発の項目においてHiCEP法の説明があります。我々は放射線医学総合研究所と共同で研究を行っています。
|
