| 研究課題/領域番号 |
16K11063
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| 研究機関 | 愛知医科大学 |
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研究代表者 |
三輪 祐子 愛知医科大学, 医学部, 助教 (90572941)
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| 研究分担者 |
岩崎 研太 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (10508881)
小林 孝彰 愛知医科大学, 医学部, 教授 (70314010)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | ABO血液型不適合腎移植 / IgG サブクラス / C1q / B細胞培養 |
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| 研究実績の概要 |
ABO血液型不適合腎移植は、DSA(ドナー特異的HLA抗体）陽性腎移植に比較して予後が良い。早期の急性抗体関連型拒絶反応(Acute AMR)の頻度は低く、また抗A/B抗体が長期接着しても、慢性抗体拒絶反応(Chronic AMR)は起きにくい。腎グラフトを保護するaccommodation（免疫順応）の状況を引き出し、正に働く傾向がある。抗A/B抗体の接着はDSA抗体によるChronic AMRを抑制できる（ベネフィットな）可能性もある。またAcute AMRのリスク因子を明確にしたうえで、抗A/B低抗体価における不必要な抗体除去療法、過剰な脱感作療法を行わないことはABO血液型不適合腎移植の安全な実施において大切なことである。そのためまず平成28年度は、【1】抗A/B抗体によるAcute AMRのリスク因子の解析を中心に行った。我々の関連施設で行われた腎移植患者のAcute AMR群、non-AMR群のレシピエント腎移植前血清を用いて、i)IgG サブクラス（IgG1,IgG2,IgG3,IgG4), total IgG, IgM測定とii)C1q測定を行った。i)の結果は、抗Aでは、IgG, IgM, IgG1, IgG2がAMR群が有意に中央値が高かった。抗BではIgG, IgG1,IgG2,IgG3がAMR群が有意に中央値が高く、抗A/B間で違いがあった。またii)のC1qは抗A/BともAMR群で有意に高かった。これらのdataは現在論文にまとめている。また移植後グラフトへの抗A/B抗体の接着により血清中の抗体価が正しく測定できない場合、iii)末梢血中のB細胞培養をin vitroで行い抗体のグラフトへの吸着が起こらない状況を作るため、今年度はその培養法の確立を行った。B細胞培養の基本培地に、刺激剤、サイトカインを加え、４日目に培地を交換し、培養後8日目に抗A/B抗体産生のピークがあり安定した系を確立しつつあり、この課題に対し2016年の移植学会でポスター発表を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成28年度は【1】抗A/B抗体によるAcute AMRのリスク因子の解析を中心に行った。我々の関連施設で行われた腎移植患者のAcute AMR群、non-AMR群のレシピエント腎移植前血清を用いて、i)IgG サブクラス（IgG1,IgG2,IgG3,IgG4), total IgG, IgM測定とii)C1q測定を行った。i)の結果は、抗Aでは、IgG, IgM, IgG1, IgG2がAMR群が有意に中央値が高かった。抗BではIgG, IgG1,IgG2,IgG3がAMR群が有意に中央値が高く、抗A/B間で違いがあった。またii)のC1qは抗A/BともAMR群で有意に高かった。これらのdataは現在論文にまとめている。また移植後グラフトへの抗A/B抗体の接着により血清中の抗体価が正しく測定できない場合、iii)末梢血中のB細胞培養を行う予定で、今年度はその培養法の確立を行った。培養後8日目に抗A/B抗体産生のピークがあり安定した系を確立しつつあり、この課題に対し昨年の移植学会でポスター発表を行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は末梢血B細胞培養法を用いて、抗A/B抗体産生細胞が、i)ナイーブもしくはメモリー細胞由来なのか？ii)T細胞非依存性抗体産生細胞（B1細胞）、T細胞依存性抗体産生細胞（B2細胞）由来なのか？その分布の違いの故に、Acute AMRのリスク因子になり得るか。セルソーティングシステムを加えて調査して行く。また【2】抗HLA抗体によるChronic AMR抑制のためのベネフィット因子（長期生着）の探索を行う。レシピエントの移植前後の血清を用い、i)抗A/B抗体のグラフトの接着が長期生着のベネフィット因子になっているか確認するために、腎グラフトが(a)廃絶した群と(b)長期生着群のレシピエント患者の移植前後の抗A/B抗体価を比較する。また各種の脱感作療法によってchroni AMRを起こしにくい状況をもたらしているかどうか確認するため、抗体価の確認だけでなく,B細胞サブセットに注目し、制御に関わるregulatory B cellの分布が、脱感作療法の種類によって変化するか？その存在比と予後関係などにも注目していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成28年度は、抗A/B抗体価IgG subclassの測定と、末梢血中のB細胞培養が実験の主な内容であったが、末梢血B細胞培養で用いる各種サイトカインや刺激剤が、他の研究課題であるchronic AMRに関わる抗HLA抗体の測定においても末梢血B細胞培養を行い重なる試薬もあるため共有することができた。そのため予定していた経費より少ない使用額となった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
今後は末梢血B細胞培養法を用いて、抗A/B抗体産生細胞が、i)ナイーブもしくはメモリー細胞由来なのか？ii)T細胞非依存性抗体産生細胞（B1細胞）、T細胞依存性抗体産生細胞（B2細胞）由来なのか？その分布の違いの故に、Acute AMRのリスク因子になり得るか。セルソーティングシステムを加えて調査して行く。また各種の脱感作療法によってchroni AMRを起こしにくい状況をもたらしているかどうか確認するため、抗体価の確認だけでなく,制御に関わるregulatory B cellの分布が、脱感作療法の種類によって変化するか？その存在比と予後関係などにも注目していく。そのための細胞分離のための各種抗体、細胞内サイトカイン染色に関わる試薬を購入する予定である。
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