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2016 年度 実施状況報告書

エストロゲン依存性子宮内膜癌におけるPOLE変異の新規バイオマーカーとしての意義

研究課題

研究課題/領域番号 16K11145
研究機関熊本大学

研究代表者

田代 浩徳  熊本大学, 大学院生命科学研究部(保), 教授 (70304996)

研究分担者 片渕 秀隆  熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (90224451)
齋藤 文誉  熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (20555742)
研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
キーワード婦人科腫瘍学 / 子宮内膜癌 / エストロゲン / 遺伝子
研究実績の概要

後方視的に子宮内膜癌患者のパラフィンブロックの組織検体を用いて、POLE変異陽性者の抽出を行う予定である。当初は、腫瘍組織内にリンパ球が少ない群を抽出し、PCRによるdirect sequence法により、抽出する予定であった。しかし、低発生頻度症例検出の効率化のため、一部の計画を変更した。まず、ミスマッチ修復遺伝子に関する抗体(抗MLH-1抗体、抗MSH-2抗体、抗PMS-2抗体、抗MSH-6抗体)を用いた免疫組織化学を行い、少なくとも1種類の蛋白の欠失を認めた症例をスクリーニングすることとした。さらに、これらの症例にサンガーシークエンスを行い、POLE変異陽性者を抽出することとした。免疫組織化学の際に、抗体PMS-2抗体と抗MSH-6抗体の染色の評価が困難であったため、新たな別の抗体を購入し、評価した。これまでに、抗MLH-1抗体、抗MSH-2抗体、抗PMS-2抗体は60症例、抗MSH-6抗体は10症例の染色が終了し、陰性だった症例は、それぞれ7例、2例、3例、0例であった。そのうち、2種類の抗体で陰性であった症例は3例、1種類のみ陰性であった症例は6例であり、計9名の患者がスクリーニングされた。年齢の中央値は、56歳(52-61歳)で、組織型は類内膜腺癌G1が6名、G2は3名であった。9名中8例にがんの家族歴がみられ、3名にリンチ症候群を疑う家族歴がみられた。現在、これらの症例にサンガーシークエンスを行い、POLE変異陽性者を抽出する準備を行っている。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

平成28年熊本地震の際に、免疫染色後のスライドグラスや実験器具が破損し、研究が一時停止した。以後、過去の子宮内膜癌症例の組織検体に対して、ミスマッチ修復遺伝子に関する抗体(抗MLH-1抗体、抗MSH-2抗体、抗PMS-2抗体、抗MSH-6抗体)を用いて免疫組織化学を行った。現在、サンガーシークエンスの準備をしている。パラフィンから遺伝子を抽出し、PCRで増幅後に、検査会社へ提出後、変異の有無を同定する方法の確立を目指している。

今後の研究の推進方策

POLE遺伝子の解析が終了すれば、変異陽性群と陰性群の臨床背景を比較する。エストロゲン製剤(妊馬尿由来のエストロゲン)の服用歴、内分泌プロファイルを調べる。腫瘍の組織切片の免疫組織化学により、DNA adduct形成能の比較検討を行う。また、エストロゲン受容体やプロゲステロン受容体などのホルモン受容体ならびにPTEN、BAF250a、CTNNB1の蛋白発現を調べ、POLEによる変異の中で、子宮内膜癌発癌の鍵となる分子を明らかにする。
基礎研究として、POLE/POLD1遺伝子をそれぞれkonckoutしたヒト正常不死化子宮内膜細胞株にカテコールエストロゲンを添加し、非添加群と比較し、軟寒天培地を用いた足場非依存性増殖能を検討する。足場非依存性増殖能を獲得した細胞を用いて、スキッドマウスに移植を行い、造腫瘍能の獲得頻度を検討する。

次年度使用額が生じた理由

平成28年熊本地震の際に、免疫染色後のスライドグラスや実験器具が破損し、研究が一時停止したため。又、当初予定していた学会への参加が難しくなったため、次年度使用額が生じた。

次年度使用額の使用計画

POLE遺伝子の解析が終了後、変異陽性群と陰性群の臨床背景を比較する。また、基礎研究として、POLE/POLD1遺伝子をそれぞれkonckoutしたヒト正常不死化子宮内膜細胞株にカテコールエストロゲンを添加し、非添加群と比較し、軟寒天培地を用いた足場非依存性増殖能を検討するための実験用具、試薬などを購入する。また、得られた成果を学会等で発表するための旅費としても使用する。

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2016

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (5件) (うち招待講演 1件)

  • [雑誌論文] CD44 Variant 6 as a Predictive Biomarker for Distant Metastasis in Patients With Epithelial Ovarian Cancer.2016

    • 著者名/発表者名
      Motohara, T., Fujimoto, K., Tayama, S., Narantuya, D., Sakaguchi, I., Tashiro, H., and Katabuchi, H.
    • 雑誌名

      Obstet Gynecol.

      巻: 127 ページ: 1003-11

    • DOI

      10.1097/AOG.0000000000001420

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Development of a mouse model for testing therapeutic agents: the anticancer effect of dienogest on endometrial neoplasms.2016

    • 著者名/発表者名
      Saito, F., Tashiro, H., Yamaguchi, M., Honda, R., Ohba, T., Suzuki, A., and Katabuchi, H.
    • 雑誌名

      Gynecol Endocrinol.

      巻: 32 ページ: 403-7

    • DOI

      10.3109/09513590.2015.1124411

    • 査読あり
  • [雑誌論文] An Ovarian Carcinoid Tumor With Peptide YY-Positive Insular Component: A Case Report and Review of the Literature.2016

    • 著者名/発表者名
      Erdenebaatar, C., Yamaguchi, M., Saito, F., Motooka, C., Tashiro, H., and Katabuchi, H.
    • 雑誌名

      Int J Gynecol Pathol.

      巻: 35 ページ: 362-8

    • DOI

      10.1097/PGP.0000000000000242.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Onionin A inhibits ovarian cancer progression by suppressing cancer cell prolioferation and protumor function of macrophages.2016

    • 著者名/発表者名
      Tsuboki, J., Fujiwara, Y., Horlad, H., Shiraishi, D., Nohara, T., Tayama, S., Saito Y., Ikeda, T., Takaishi, K., Tashiro, H., Katabuchi, H., Talkeya, M., and Komohara, Y.
    • 雑誌名

      Sci Rep.

      巻: 6 ページ: 29588

    • DOI

      10.1038/srep29588.

    • 査読あり
  • [学会発表] 卵巣の明細胞腺癌と類内膜腺癌の鑑別における PET/CT-scan の有用性2016

    • 著者名/発表者名
      瀬尾 優太朗、今村裕子、本原剛志、 斎藤文誉、田代浩徳、浪本智弘、山下康行、三上芳喜、片渕秀隆
    • 学会等名
      第17回Japanese Society for the Advancement of Women's Imagingシンポジウム
    • 発表場所
      淡路市
    • 年月日
      2016-09-02 – 2016-09-03
  • [学会発表] 卵巣癌におけるOnionin Aの細胞増殖とSTAT3の活性化に対する作用2016

    • 著者名/発表者名
      坪木純子、藤原章雄、髙石清美、菰原義弘、田代浩徳、竹屋元裕、片渕秀隆
    • 学会等名
      第15回日本婦人科がん分子標的研究会
    • 発表場所
      札幌市
    • 年月日
      2016-08-19 – 2016-08-20
  • [学会発表] 子宮頸部前癌病変と IA 期の主治療・妊娠合併の子宮頸部前癌病変と子宮頸癌 の主治療2016

    • 著者名/発表者名
      田代浩徳
    • 学会等名
      第 58 回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
    • 発表場所
      米子市
    • 年月日
      2016-07-08 – 2016-07-10
    • 招待講演
  • [学会発表] 上皮性卵巣癌においてCD44 variant 6は実質臓器への遠隔転移を予測するバイオマーカー として有用である2016

    • 著者名/発表者名
      本原剛志、藤本広一、田山親吾、Narantuya Dashdemberel、坂口 勲、田代浩徳、片渕秀隆
    • 学会等名
      第 58 回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
    • 発表場所
      米子市
    • 年月日
      2016-07-08 – 2016-07-10
  • [学会発表] 子宮頸部間質の子宮内膜症性嚢胞から悪性化した子宮頸癌の1例2016

    • 著者名/発表者名
      髙石清美、齋藤文誉、本原剛志、坂口 勲、本田律生、田代浩徳、三上芳喜、片渕秀隆
    • 学会等名
      第 58 回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
    • 発表場所
      米子市
    • 年月日
      2016-07-08 – 2016-07-10

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公開日: 2018-01-16  

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