| 研究課題/領域番号 |
16K11162
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| 研究機関 | 大阪医科大学 |
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研究代表者 |
寺井 義人 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (90278531)
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| 研究分担者 |
林 正美 大阪医科大学, 医学部, 講師 (00551748)
大道 正英 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10283764)
田中 良道 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10625502)
恒遠 啓示 大阪医科大学, 医学部, 講師 (70388255)
田辺 晃子 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (70454543)
佐々木 浩 大阪医科大学, 医学部, 講師 (80432491)
兪 史夏 大阪医科大学, 医学部, 助教 (80625674)
藤原 聡枝 大阪医科大学, 医学部, 助教 (90707960)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | EMT / miRNA / 卵巣癌 / エキソソーム |
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| 研究実績の概要 |
Caov-3細胞の検討ではCD24陽性細胞はCD24陰性細胞と比べ、細胞増殖が強く、浸潤能が強く、コロニー形成能が高く、さらにCDDP耐性を認めた。また、ヌードマウスの検討ではCD24陽性群はCD24陰性群と比べ、播種病巣および腹水貯留が著明であり、体重増加率、腹囲増加率ともに有意差を認めた。CD24陽性群の播種病巣のRT-PCRにおいてSnailの発現が増強され、E-cadherinの発現減弱を認めた。さらにCDDP内包したCD24標識の高分子ミセルによる実験で、CDDP-CD24-LIPO群の治療期間における腹囲増加は他の2群と比べ有意に軽減していた。さらに全生存期間はPBS群 46.8±9.9 日、CDDP群 47.8±7.4 日に対して、CDDP-CD24-LIPO群71.2±28.3 日と有意に延長を認めた（p<0.05）。これらの結果から、CD24をマーカーとしてEMTを制御する新たな遺伝子を同定するために、卵巣癌白金製剤耐性株（Caov-3、A2780CP）を用い、MACS法で分離したCD24陽性細胞・CD24陰性細胞で、miRNAマイクロアレイを用い、CD24陽性で発現上昇するmiRNAをコンピューターリサーチし、EMTに関わる新規miRNAを同定した。現在候補miRNA 36248個中、2倍以上の上昇を認めたmiRNAのうち5候補および2倍以上低下したmiRNA4個の候補を抽出した。さらに、Caov-3 CD24陽性細胞培養液中のmiRNAのmicroarrayを解析中で、エキソソームとして体外に分泌されるmiRNAと一致するかを調べている。さらに、卵巣癌細胞株Caov-3を用い、細胞増殖、細胞周期、invasion assayによる影響を調べている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
CD24陽性細胞から分泌されるエキソソーム中のmiRNAのうち、癌の浸潤・転移に関与するmiRNAをmicroRNA arrayで調べているが、まだ候補miRNAの中から、実際に癌細胞の細胞増殖、細胞周期、invasion assayによる影響を調べている段階である。
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| 今後の研究の推進方策 |
卵巣癌細胞株Caov-3を用い、候補miRNAを過剰発現した場合と抑制した場合での、細胞増殖、細胞周期、invasion assayによる影響を調べる。候補miRNAの機能をブロックするLocked Nucleic Acids (LNA) inhibitor（Exiqon社）のLNA-miRNAを作成し、細胞形態変化、細胞増殖能、浸潤能への影響を調べる。さらに、候補miRNAの中皮細胞への影響を調べていく
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