慢性中耳炎における制御性T細胞の免疫寛容化機序の解析

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K11187
• 研究機関: 大分大学
• 研究代表者: 平野 隆 大分大学, 医学部, 講師 (20305056)
• 研究分担者: 川野 利明 大分大学, 医学部, 助教 (30633424) ; 鈴木 正志 大分大学, 医学部, 教授 (60211314)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 制御性T細胞 / Bリンパ球 / 頸部リンパ節 / インフルエンザ菌

研究実績の概要

OMPを経鼻免疫を行い、頸部リンパ節に免疫誘導を行い、制御性T細胞が頸部リンパ節に与える影響について検討した。BALB/cマウスに、免疫抗原としてインフルエンザ菌由来OMPをコレラトキシンと共に３回経鼻免疫を行い、OMP免疫マウスを作成した。投与後21日目に、ワクチン投与マウスより頸部リンパ節よりスチールメッシュによる細砕にて単核球(MNC)を分離した。未免疫のマウスとOMP免疫マウス各５匹から脾臓を採取し、細胞レベルにまで細砕し、制御性T細胞とhelper T細胞を分離した。頸部リンパ節由来単核球と制御性T細胞を共に培養し、OMP添加培養を行い、２４、７２時間経過後に培養液および培養細胞を採取した。採取した培養液はBio-Plex TM Pro Mouse Cytokine Assayによりサイトカイン産生について解析を行い、培養細胞はフローサイトメトリー解析を行った。頸部リンパ節由来MNCと制御性T細胞 及びhelper T細胞との共培養において、72時間培養では、Controlと比較してIL-10の産生が亢進した。フローサイトメトリーによる解析では、制御性T細胞、またはhelper T細胞 との共培養において、Controlと比較して24時間においてCD69+B220細胞の割合が増加していたが、72時間培養においては、Controlと比較してナイーブマウスおよびOMP免疫マウスにおいて明らかな差を認めなかった。B細胞の抗原提示能に関して、 CD80+B220細胞の割合は、24時間培養においては各群における割合に差は認めないものの、72時間培養において、Controlと比較してCD80+B220細胞の割合はナイーブマウスおよびOMP免疫マウスでは低下していた。

研究成果

• [雑誌論文] Interaction between regulatory T cells and antibody producing B cells for the immune responses at the upper respiratory mucosae against nontypeable Haemophilus influenza-in vitro assay model- (2019)
  • 著者名/発表者名: Hirano T., Kadowaki Y., Matsunaga T., Yoshinaga K., Kawano T., Moriyama M., Suzuki M.
  • 雑誌名: Annals of Otology, Rhinology and Laryngology 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [学会発表] 経鼻粘膜免疫後の頸部リンパ節に対する制御性T細胞が与える影響 (2018)
  • 著者名/発表者名: 平野 隆，川野利明，松永崇志，門脇嘉宣、児玉 悟、鈴木正志
  • 学会等名: 日本耳鼻咽喉科免疫アレルギー学会