エクソーム解析による眼内悪性リンパ腫の原因遺伝子同定

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K11281
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 田中 理恵 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (70746388)
• 研究分担者: 蕪城 俊克 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (00280941) ; 田岡 和城 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (30529178)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 眼内悪性リンパ腫 / 遺伝子変異 / エクソーム解析 / 網羅的遺伝子解析

研究実績の概要

2016年8月から2017年3月30日までに眼内悪性リンパ腫が疑われた患者30例35眼に対して硝子体手術を施行し、①細胞診、②IL10/IL6濃度比、③免疫グロブリンH鎖（IgH）遺伝子再構成、④フローサイトメトリー（CD3:CD19比、κ:λ比）の検査を行った。その結果、17例21サンプルについて眼内悪性リンパ腫と診断した。眼内悪性リンパ腫は殆どの症例がB細胞系リンパ腫であることが知られている。今回、微小サンプルから腫瘍細胞を効率よく採取するため、眼内悪性リンパ腫と診断された患者の硝子体液21サンプルについて、B細胞マーカーであるCD20/CD19に対するモノクローナル抗体で染色し、悪性リンパ腫細胞をフローサイトメトリーで回収した。回収された悪性リンパ腫細胞数は約100個から数万個と症例によりかなりの違いがあった。腫瘍細胞は培養し、凍結保存するとともに、一部の細胞からDNA、mRNAを回収した。網羅的な遺伝子変異の解析（エクソーム解析）を行うにはDNA量が足りないため、MDA法を用いてDNAの増幅を行った。患者の正常細胞と腫瘍細胞におけるDNAについてエクソン領域の遺伝子配列を比較し、腫瘍細胞のエクソン上の変異を検出を試みた。これまでに解析した4サンプルのうち1サンプルについてはエクソーム解析が可能であった。残り3サンプルに関しては増幅が不良で解析不能であった。現在、増幅不良の原因について検討を行っている。現在、抽出した腫瘍細胞の一部はセルカバーで保存し、転写効率の良好な方法を検討し、これを用いてRNAからcDNAへ転写・増幅している。今後も硝子体サンプルの採取を継続し、条件設定を最適化することで微量な眼内悪性リンパ腫細胞のDNAの増幅を行ってエクソーム解析を行っていく予定である。
研究はやや遅れていると考える。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

当初から本研究の眼内悪性リンパ腫患者の目標症例数を40例としていたが、現在のところ17例21サンプルが得られている状態である。また、遺伝子解析についても網羅的遺伝子解析を行うにはDNA量が不足することが判明した。MDA法を用いてDNAの増幅を行うことで、エクソーム解析が可能となる目処はついたが、増幅がうまくかからないサンプルも多く、現在その原因を検討している。さらに硝子体サンプルの採取を継続し、サンプル数を増やす必要がある。研究はやや遅れていると考える。

今後の研究の推進方策

次年度も眼内悪性リンパ腫患者からの硝子体液の収集を継続し、目標症例数を40例の達成を目指す。眼内悪性リンパ腫細胞を回収し、培養、DNA抽出を行う。DNA抽出やDNA増幅の至適条件について条件検討を行い、エクソーム解析に必要なDNA量の確保を目指す。次年度はさらに多くのサンプルでエクソーム解析を行い、眼内悪性リンパ腫に高頻度にみられる遺伝子変異を絞り込んでいく予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Scleritis Associated with SAPHO Syndrome: A Case Report. (2017)
  • 著者名/発表者名: Tanaka R, Sakurai K, Kaburaki T.
  • 雑誌名: Ocular Immunology and Inflammation 巻: Jan 6 ページ: 1-3
  • DOI: 10.1080/09273948.2016.1264611.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Ocular Inflammation Associated with Polymyalgia Rheumatica without Concomitant Giant-Cell Arteritis: A Report of Three Cases. (2017)
  • 著者名/発表者名: Arai T, Tanaka R, Kaburaki T.
  • 雑誌名: Ocular Immunology and Inflammation 巻: Feb 22 ページ: 1-4
  • DOI: 10.1080/09273948.2017.1278776.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Atypical presentation of primary intraocular lymphoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Komatsu K, Sakai T, Kaburaki T, Tsuji H, Tsuneoka H
  • 雑誌名: BMC ophthalmology 巻: Oct 3;16(1) ページ: 171
  • DOI: 10.1186/s12886-016-0350-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Anti-Collapsing Response-Mediating Protein-5 Antibody-Positive Paraneoplastic Perioptic Neuritis without Typical Neurological Symptoms. (2016)
  • 著者名/発表者名: Igarashi N, Sawamura H, Kaburaki T, Aihara M
  • 雑誌名: Neuroophthalmology 巻: Oct 27;41(1) ページ: 24-29
  • DOI: 10.1080/01658107.2016.1241283
  • 査読あり
• [雑誌論文] 漿液性網膜剥離を主症状とした眼内悪性リンパ腫の1例. (2016)
  • 著者名/発表者名: 曽我 拓嗣, 稲用 和也, 戸塚 清人, (蕪城 俊克, 他6名、5番目)
  • 雑誌名: あたらしい眼科 巻: 33(3) ページ: 427-431
  • 査読あり
• [雑誌論文] 虹彩炎の急性増悪を呈した風疹ウイルス関連Fuchsぶどう膜炎の1例. (2016)
  • 著者名/発表者名: 坪田 裕喜子, 藤野 雄次郎, 寺尾 亮, (蕪城 俊克, 他3名、3番目)
  • 雑誌名: あたらしい眼科 巻: 33(4) ページ: 594-596
  • 査読あり
• [雑誌論文] 再発性多発軟骨炎 (2016)
  • 著者名/発表者名: 田中 理恵, 蕪城 俊克
  • 雑誌名: あたらしい眼科 巻: 7 ページ: 941-946
• [学会発表] 近年の東京大学医学部附属病院におけるぶどう膜炎初診患者の疫学的検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 白濱新多朗、蕪城 俊克、田中理恵、中原久恵、大友一義、高本光子、冲永貴美子、藤野 雄次郎、相原 一
  • 学会等名: 第70回日本臨床眼科学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2016-11-05 – 2016-11-05
• [学会発表] トキソプラズマ網脈絡膜炎11例の臨床像の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 日下部茉莉、蕪城俊克、田中理恵、大友一義、高本光子、中原久恵、冲永貴美子、白濱新多朗、沼賀二郎、藤野雄次郎、相原 一
  • 学会等名: 第70回日本臨床眼科学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2016-11-05 – 2016-11-05
• [学会発表] Long term Safety and Efficacy of Adalimumab in Non-infectious Uveitis patients. (2016)
  • 著者名/発表者名: 蕪城俊克 , 後藤 浩, Eric B. Suhler, Glenn J. Jaffe, Quan Dong Nguyen, Antoine P. Brezin, Manfred Zierhut, Albert Vitale, Mirjam E. van Velthoven, Alfredo Adan, Lyndell Lim, Michal Kramer, Ariel Schlaen, Eric Fortin, Cristina Muccioli, Anne Camez, Alexandra Song, Martina Kron, Samir Tari, Andrew D. Dick.
  • 学会等名: 第70回日本臨床眼科学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2016-11-05 – 2016-11-05
• [学会発表] 原発性眼内悪性リンパ腫に対する全身および局所化学療法と予防的全脳照射の併用療法 (2016)
  • 著者名/発表者名: 田中理恵、蕪城俊克、松田順子、田岡和城、山下英臣、中村文彦、松田出、辻英貴、黒川峰夫、相原 一
  • 学会等名: 第70回日本臨床眼科学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2016-11-03 – 2016-11-03
• [学会発表] シンポジウム５ 眼部腫瘍診断の最前線 -微量検体から分かること- 「PCR検査」 (2016)
  • 著者名/発表者名: 蕪城俊克
  • 学会等名: 第70回日本臨床眼科学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2016-11-03 – 2016-11-03
• [学会発表] 再発性多発軟骨炎に伴う強膜炎7例の臨床像 (2016)
  • 著者名/発表者名: 田中理恵、蕪城俊克、大友一義、高本光子、冲永貴美子、中原久恵、藤野雄次郎、新井 隆浩、相原一
  • 学会等名: 第50回日本眼炎症学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2016-07-02 – 2016-07-02
• [学会発表] 脳炎発症から6年後に発症した単純ヘルペスウイルスによる急性網膜壊死の1例 (2016)
  • 著者名/発表者名: 冲永貴美子、蕪城俊克、中島富美子、田中理恵、石井清
  • 学会等名: 第50回日本眼炎症学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2016-07-01 – 2016-07-01
• [学会発表] 梅毒性ぶどう膜炎７例の臨床像の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 根本穂高、蕪城俊克、田中理恵、大友一義、 高本光子、川島秀俊、藤野雄次郎、相原一
  • 学会等名: 第50回日本眼炎症学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2016-07-01 – 2016-07-01
• [学会発表] Clinical characteristics of Japanese patients with scleritis. (2016)
  • 著者名/発表者名: Rie Tanaka, Kazuyoshi Ootomo, Mitsuko Takamoto, Keiko Komae, Jiro Numaga, Yujiro Fujino, Makoto Aihara, Toshikatsu Kaburaki
  • 学会等名: ARVO2016
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2016-05-03 – 2016-05-03
  • 国際学会
• [学会発表] Combined intravitreal methotrexate and immunochemotherapy followed by reduced-dose whole-brain radiotherapy for newly diagnosed primary B-cell intraocular lymphoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Junko Matsuda, Toshikatsu Kaburaki, Rie Tanaka, Hisae Nakahara, Mitsuko Takamaoto, Kimiko Okinaga, Kazuyoshi Otomo, Keiko Komae, Makoto Aihara
  • 学会等名: ARVO2016
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2016-05-03 – 2016-05-03
  • 国際学会
• [学会発表] Serum cytokine concentrations before and after starting of infliximab therapy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hisae Nakahara, Toshikatsu Kaburaki, Rie Tanaka, Kazuyoshi Ootomo, Mitsuko Takamoto, Ayako Karakawa, Kimiko Okinaga, Junko Matsuda, Yujiro Fujino, Hidetoshi Kawashima, Makoto Aihara.
  • 学会等名: ARVO2016
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2016-05-01 – 2016-05-01
  • 国際学会
• [学会発表] リウマチ性多発筋痛症に眼炎症性疾患を合併した5例9眼 (2016)
  • 著者名/発表者名: 新井隆浩、田中理恵、蕪城俊克、高本光子、冲永貴美子、小前惠子、藤野雄次郎.
  • 学会等名: 第120回日本眼科学会総会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2016-04-07 – 2016-04-07
• [学会発表] ベーチェット病ぶどう膜炎におけるインフリキシマブ導入前後の血清中サイトカイン変化 (2016)
  • 著者名/発表者名: 中原久惠、蕪城俊克、田中理恵、大友一義、高本光子、小前恵子、冲永貴美子、松田順子、沼賀二郎、藤野雄次郎.
  • 学会等名: 第120回日本眼科学会総会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2016-04-07 – 2016-04-07
• [学会発表] 特異な臨床像を呈した水痘帯状疱疹ウイルス網膜炎の 3 例 (2016)
  • 著者名/発表者名: 冲永貴美子、蕪城俊克、田中理恵、石井清、高本光子、中原久恵、小前恵子、藤野雄次郎.
  • 学会等名: 第120回日本眼科学会総会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2016-04-07 – 2016-04-07