| 研究課題/領域番号 |
16K11455
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| 研究機関 | 九州歯科大学 |
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研究代表者 |
豊野 孝 九州歯科大学, 歯学部, 准教授 (10311929)
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| 研究分担者 |
中富 満城 九州歯科大学, 歯学部, 講師 (10571771)
片岡 真司 九州歯科大学, 歯学部, 助教 (80364149)
瀬田 祐司 九州歯科大学, 歯学部, 教授 (90291616)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 転写因子 / 味覚受容体 / Tas1r1 / 転写調節 / KLF5 |
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| 研究実績の概要 |
生体内においてアミノ酸(うま味)受容体T1R1は、消化器系、筋組織および各種の臓器においてその発現が認められている。しかしながら、その転写調節機構の詳細は明らかになっていない。そこで、本研究では筋芽細胞株C2C12を用いて、マウスT1R1遺伝子プロモーター領域中に存在する転写活性化配列に結合する転写因子の機能解析を行った。
マウスT1R1遺伝子プロモーター領域中の転写活性化配列中(開始コドン上流-148bp ~ -91bp)には、SP/KLFファミリーが結合するGT-boxが存在していた。さらに、ヒト、イヌおよびブタのT1R1遺伝子の同じ領域においてもGT-boxが認められた。そこで、RNAi法を用いてSP/ KLFファミリー(Sp1, Sp3, Sp4, KLF2, KLF4, KLF5)の発現阻害を行い、リアルタイムPCR法を用いてT1R1遺伝子の発現量を定量した。その結果、KLF5, Sp4において発現量の低下が認められた。次に過剰発現法を用いてKLF5およびSp4の過剰発現を行ったところ、KLF5においてT1R1遺伝子の発現量の増加が認められた。さらにENCODEデータベースのChIP-seqデーターを検索したところ、C2C12細胞においてKLF5のGT-boxへの結合が認められた。
以上の結果より、マウスT1R1遺伝子のプロモーター領域中のGT-boxにKLF5が結合し、転写の活性化に関与していることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
これまでのレポーターアッセイ法および、siRNA法および過剰発現法などの研究手法により、マウスT1R1遺伝子のプロモーター領域中のGT-boxに転写因子KLF5が結合し、転写調節に関わっていることを明らかにしている。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの研究により、マウスT1R1遺伝子の転写調節領域において転写調節に関わるKLF5を選抜している。今後は、ゲノム編集法を使用して転写因子KLF5の機能の欠損細胞株を作成し、その機能解析を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
これまでの研究により、マウスT1R1遺伝子の転写調節領域において転写調節に関わる転写因子KLF5を選抜している。その転写因子の機能の欠損をゲノム編集法を使用して試みている。しかしながら、条件検討およびその欠損に想定以上に時間を要している。そのために、試薬の購入が遅延し、次年度使用額が生じた。
次年度使用額については、条件検討の為の試薬の購入に使用予定である。
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