| 研究課題/領域番号 |
16K11578
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| 研究機関 | 福岡歯科大学 |
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研究代表者 |
畠山 純子 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 医員 (50374947)
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| 研究分担者 |
城戸 瑞穂 佐賀大学, 医学部, 教授 (60253457)
阿南 壽 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 教授 (80158732)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 象牙芽細胞様細胞 / 機械刺激センサー / TRPV4 |
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| 研究実績の概要 |
歯にメカノストレスが加わると、その生体反応により象牙質の石灰化が認められる。象牙芽細胞にメカノセンサーであるTRPVチャネルが存在し、石灰化過程において機能的な働きをしている可能性が報告された。メカノストレス受容によるTRPVチャネルの活性化により、象牙芽細胞により象牙質にカルシウムの排出がなされ、反応性象牙質形成が起こると予想される。しかしメカノストレス受容による象牙質の基質分泌および、象牙芽細胞動態に与える影響においてTRPV4刺激を与えた時の石灰化の程度を検討した。
本研究では、ラット歯髄由来象牙芽細胞様細胞株。KN-3細胞（九州歯科大学口腔保存治療学分野 北村知昭教授より供与）を用いた。TRPV4のKN－３細胞に与える影響を検討するために、TRPV4の抑制剤であるRN1734、または促進剤である4α-Phorbol 12, 13-Didecanoate)を用い、細胞増殖試験、ALP活性およびアリザリンレッド染色を行い、TRPV4の象牙芽細胞石灰化能に与える影響について評価した。4α-PDD 、またはRN1734の添加により、KN-3細胞の細胞増殖に差は認められなかった。アリザリンレッド染色において、TRPV4促進剤である4α-PDDの添加によりKN-3細胞は有意な石灰化の促進を示し、またアルカリフォスファターゼ活性の増加を認めた。しかしTRPV4抑制剤であるRN1734の添加ではアリザリンレッド染色による石灰化の促進は認められず、アルカリフォスファターゼ活性の抑制を認めた。これらのことから、メカノセンサーTRPV4は象牙芽細胞用細胞の硬組織形成に関与する可能性が示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は（H30）歯胚および象牙芽細胞様細胞におけるTRPV4の石灰化における役割についての検討を先行して行い、in vitroにおけるRT-PCRによる石灰化マーカーの解析、TRPV4アゴニストによる石灰化亢進の結果を得た。in vivoにおける歯胚および象牙質におけるメカノセンサーの発現解析および局在を免疫組織学的染色、in situ hybridizationによる解析が遅延している。
当初の予定では、最初にマウス上下第一臼歯の歯胚と萌出後の歯の歯髄・象牙質を用いてメカノセンサーの発現解析および、局在を免疫組織学的染色およびin situ hybridizationにより、発現量を定量的PCR法により解析する予定であったが、現在、進行の遅延により、次年度に実験を計画して
いる。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は歯胚および象牙芽細胞における歯髄複合体におけるメカノセンサーの発現解析を行う。局在を免疫組織化学的染色およびin situ hybridizationにより、発現量を定量的PCRにより解析する。また培養細胞における進展刺激を加え、機械刺激センサーの発現についても解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予定では、最初にマウス上下第一臼歯の歯胚と萌出後の歯の歯髄・象牙質を用いてメカノセンサーの発現解析および、局在を免疫組織学的染色およびin situ hybridizationにより、発現量を定量的PCR法により解析する予定であった。現在、進行の遅延により、次年度に実験を計画しており残額が生じている。
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