| 研究課題/領域番号 |
16K11713
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| 研究機関 | 福岡歯科大学 |
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研究代表者 |
森田 浩光 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 准教授 (30380463)
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| 研究分担者 |
今井 裕子 九州大学, 大学病院, 助教 (30592688)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 口腔癌 / 細胞増殖 / 容積感受性クロライドチャネル |
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| 研究実績の概要 |
これまで、TMEM16A、LRRC8A及びbestrophin1(BEST1)が容積感受性クロライドチャネルの分子実体の候補と考えられてきたが、口腔扁平上皮癌細胞（HST-1及びHSC3）においては、TMEM16AとLRRC8Aの相互作用により容積感受性クロライド電流を制御していること、この容積感受性クロライドチャネルが細胞増殖に関与していること、容積感受性クロライドチャネルの選択的阻害薬であるDCPIBの投与により、アポトーシスが引き起こされること、本現象に対しBEST1は関与していないことを各種実験方法（パッチクランプ法、RT-PCR法、ウエスタンブロット、免疫沈降、In situ Proximity Ligation Assay（PLA）システム、フローサイトメトリー、WST-8を用いたセルカウント等）により明らかにしてきた。
さらに今年度は、1)口腔扁平上皮癌細胞（HST-1及びHSC3）におけるTMEM16Aと各種TRPチャネル・水チャネル複合体形成及び機能解析と2)TMEM16AとLRRC8Aの相互作用をFRETにて観察することを目標として実験を行った。その結果、口腔扁平上皮癌細胞では、RT-PCRにより、TMEM16Aと複合体を形成すると考えらえているTRPC1, V4, M7, P1, P2のいずれの遺伝子の発現が認められたものの、免疫沈降やPLAシステムにより複合体形成は確認できなかった。さらに、FRETに関しては、TMEM16A及びLRRC8Aのいずれの遺伝子のクローニングは行ったものの、はっきりとした結果は得られなかった。しかしながら、共同研究者及び連携研修者と相談し、PLAシステムにて結果が出ているので、FRETによる実験結果を示すことができなくとも本研究の遂行には影響がないことを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度は、1)口腔扁平上皮癌細胞（HST-1及びHSC3）におけるTMEM16Aと各種TRPチャネル・水チャネル複合体形成及び機能解析と2)TMEM16AとLRRC8Aの相互作用をFRETにて観察すること、3) マイクロアレイ実験によるTMEM16A及びLRRC8Aの各種癌細胞における発現検索を目標として実験を行った。その結果、口腔扁平上皮癌細胞では、RT-PCRにより、TMEM16Aと複合体を形成すると考えらえているTRPC1, V4, M7, P1, P2のいずれの遺伝子の発現が認められたものの、免疫沈降やPLAシステムにより複合体形成は確認できなかった。さらに、FRETに関しては、TMEM16A及びLRRC8Aのいずれの遺伝子のクローニングは行ったものの、プローブのデザインによるものかわからないが、はっきりとした結果は得られなかった。一方で、マイクロアレイによる実験に関しては、研究費の関係上、遂行できなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度は、昨年度に実施予定であったマイクロアレイを用いた各種癌細胞における発現実験及びヌードマウスを用いた口腔扁平上皮癌に対するDCPIBによる増殖抑制効果の観察等を行う予定である。さらに、実験の成果をまとめて専門学会誌に投稿する予定である。時間が許せば、関連した実験も併行して行い、新たな生命現象の発見につなげたいと考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
DNAチップを用いたマイクロアレイを実施予定としていたが、残額が外注価格に満たなかったため今年度は実施できなかった。したがって、来年度の予算と合わせて外注することとしたため、残額を次年度繰越金とした。
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