研究課題
破骨細胞の分化において、NFATc1（破骨細胞形成マスター転写因子）の活性化に必要なカルシウムシグナルの誘導はITAMを有するアダプター分子を介する。ITAMをもつアダプター分子FcRγやDAP12の遺伝子二重欠損マウスは破骨細胞の分化障害を示すことから、ITAMが破骨細胞の分化に必須であることが報告された。一方、細胞増殖のシグナル伝達に関わる機能分子としてITAMを有するSTAMが同定されている。現在までに野生型マウスから作成した破骨細胞前駆細胞にレトロウィルスベクターを使用してSTAM1分子を過剰発現して破骨細胞形成を行ったところ、過剰発現したほうが破骨細胞形成が促進された。一方、破骨細胞前駆細胞にshRNAを使用してSTAM1をノックダウンして破骨細胞形成を行ったところ破骨細胞形成は抑制された結果は得られている。次に、STAM2をレトロウィルスベクター(pMX-puro)を使用しての破骨細胞前駆細胞への遺伝子導入を試みた。まず、レトロウィルスベクター使用のためレトロウィルスパケージング細胞であるPlat-E細胞のストックを作成した。次に、STAM2のレトロウィルスベクター作成するため、つなぎ変えのベクター作成した。そのベクターよりSTAM2遺伝子を切り出し、pMX-puroにSTAM2遺伝子をつなぎ替えたところまで終了した。その後、Plat-E細胞にSTAM2を組み込んだレトロウィルスベクターをtransfectionする。その後、Plat-E細胞から産生されるレトロウィルスを集める。マウスの骨髄細胞からM-CSFの作用により破骨細胞前駆細胞を作成し、この破骨細胞前駆細胞に産生されたレトロウィルスを感染させ、細胞DNA内にSTAM2遺伝子を組み込む。この際、M-CSFが大量に必要であるが、そのM-CSFを大量にCMG細胞より作成した。
すべて 2019 2018
すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 6件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (22件) (うち国際学会 11件、 招待講演 1件)
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