研究課題/領域番号 |
16K11807
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研究機関 | 九州大学 |
研究代表者 |
加藤 大樹 九州大学, 歯学研究院, 助教 (30452709)
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研究分担者 |
佐藤 浩 九州大学, 歯学研究院, 助教 (00421313)
広藤 雄太 九州大学, 大学病院, 医員 (80759746) [辞退]
山座 治義 九州大学, 歯学研究院, 講師 (30336151)
増田 啓次 九州大学, 大学病院, 講師 (60392122)
野中 和明 九州大学, 歯学研究院, 教授 (90128067)
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研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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キーワード | 口唇裂口蓋裂 |
研究実績の概要 |
口唇裂口蓋裂発症頻度は、世界的に見て700人に1人と先天性異常の中で最も高い。そのため発症メカニズムの解明と予防法の開発は急務であるが、母体要因と遺伝要因が複雑に相互作用し発症する多因子疾患であるため、発症の分子メカニズムは十分に明らかにされていない。我々は、口唇裂口蓋裂を高効率に自然発症するCL/Frマウスを系統維持活用しながら、母体要因と遺伝要因の両面からその発症メカニズムの解析を行ってきた。CL/Frマウスの遺伝子発現解析の結果から、CL/Frマウスでは、口唇裂口蓋裂を自然発症しないC57BL/6と比較して、酸化ストレス関連遺伝子であるヘムオキシゲナーゼ2 (HO-2)の発現が低下していることを見出した。この結果より、口唇裂口蓋裂発症の一因として酸化ストレスが強く示唆され、CL/Frマウスでは酸化ストレスに対する抵抗性が低下しているのではないかと予測された。そこで本研究は、CL/Frマウスを酸化ストレスによる口唇裂口蓋裂自然発症のモデルとして、酸化ストレスによる口唇裂口蓋裂発症メカニズムを解明することを研究目標とした。本年度は、培養細胞レベルでの酸化ストレス関連因子の発現解析を行った。CL/Frと C57BL/6から調製したマウス胎児線維芽細胞(MEF)を培養し、HO-2以外の酸化ストレス関連遺伝子の発現を解析した。その結果、HO-1が上昇傾向にあることがわかった。HO-2は定常的に発現しているのに対して、HO-1は酸化ストレスに応じて発現が上昇することから、Cr/FrマウスにおいてはC57BL/6と比較して、細胞内の酸化ストレスが上昇していることが示唆される。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は、主に培養細胞での解析を行った。酸化ストレス関連因子の発現解析を行った結果、HO-1が上昇傾向にあることがわかった。次に酸化ストレスを与えた条件で、酸化ストレス関連因子の発現解析を行う予定であったが、CL/FrのMEFが生存不良のため解析を行うことができなかった。C57BL/6の生存は問題なかったことから、CL/FrのMEFは長期の凍結保存に不向きであると考えられる。そのため現在、新たなMEFの調製準備を行っている。
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今後の研究の推進方策 |
CL/FrおよびC57BL/6よりMEFを再調製し、酸化ストレスを与えた条件での酸化ストレス関連因子の発現変動を解析する。また、酸化ストレスを与えた条件での細胞増殖と細胞遊走能を測定し、CL/Fr とC57BL/6を比較することで、これら2種類の細胞の酸化ストレスへの耐性を解析する。CL/FrのMEFは長期保存に向かないため、凍結保存せず細胞を用事調製して用いるか、歯髄由来幹細胞など他の細胞の利用についても検討する。
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次年度使用額が生じた理由 |
CL/Fr由来のMEFが、生存不良のため、酸化ストレスを与えた条件での酸化ストレス関連遺伝子の発現解析や、細胞増殖解析、細胞遊走能解析などの解析を進めることができなかったため、次年度使用額が生じた。
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次年度使用額の使用計画 |
H28年度と同様に研究経費は主に消耗品に使用し、その他、遺伝子発現解析のDNA合成費用や、旅費、論文出版費に使用する予定である。
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