| 研究課題/領域番号 |
16K11815
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| 研究機関 | 日本歯科大学 |
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研究代表者 |
下村 淳子 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (00386286)
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| 研究分担者 |
梨田 智子 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (10133464)
中原 賢 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (20610257)
下村 裕 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (70397107)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | PTH1R / 点突然変異 |
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| 研究実績の概要 |
副甲状腺ホルモン(PTH)・副甲状腺ホルモン関連ペプチド(PTHrP)の受容体(以下PTH1R)は骨代謝だけではなく、歯の萌出に重要な役割を持つ。本研究は、Jansen型変異PTH1Rの分子病理，すなわちその誘導シグナリング経路と骨形成系細胞の分化に対する異常について解明するものである。これにより、歯槽骨におけるPTH1Rの作用を解明するとともに、PTH1Rの関与する歯の萌出機構を明らかにすることを目的とする。
平成28年度は、野生型およびJansen型PTH1R cDNAを組み込んだ発現ベクターを用い、その機能をin vitroの実験系にて解析を行った。
平成29年度は、DMP1 promoter/enhancer cassetteに組み込んだvectorを構築し、骨・歯槽骨特異的なJansen型PTH1Rトランスジェニックマウスの作製を行う計画であった。実際は、野生型およびJansen型PTH1R cDNAのc末にHAタグを組み込んだものを、DMP1 promoter/enhancer cassetteに組み込んだvectorを構築し、それら２種類のベクターを、それぞれ生後3-4日齢のマウス頭頂骨を切り出し、骨細胞および骨芽細胞系の細胞を分画・培養したprimary cultureにlipofectamin法を用いてtranfectionし、野生型およびJansen型PTH1R vectorの細胞内での発現確認を行うところまでの作業を行った。野生型およびJansen型PTH1Rは、それぞれ細胞内での局在に違いを認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
DMP1 promoter/enhancer cassetteに組み込んだvectorの構築を行う際、DMP1配列が長いため、組み込み作業に予想以上に時間がかかったため。また、マウス頭頂骨のprimary cultureへのtransfectionを行う際の条件設定にもかなりの時間を要した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、構築したvectorを用いて、野生型およびJansen型PTH1Rのトランスジェニックマウスを作製する。このマウスを用い、PCNA(proliferating cell nuclear antigen)とBrdUの取り込みで細胞増殖を、また、type X collagenや軟骨基質の石灰化などをin situ hybridizationや未脱灰標本を用いた電顕観察によりJansen型PTH1Rの細胞内局在・シグナリングの変遷による組織への影響を野生型との比較も含め解析する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成２９年度中にトランスジェニックマウスを作製する予定で予算を組んでいたが、次年度以降に作製時期を延長したため、マウス作製用の経費分が繰り越しとなった。
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