低濃度フッ化物による間葉系幹細胞老化の分子機構の解明

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K11898
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 那須 郁夫 日本大学, 松戸歯学部, 教授 (80112952)
• 研究分担者: 有川 量崇 日本大学, 松戸歯学部, 准教授 (50318325) ; Bhawal Ujjal 日本大学, 松戸歯学部, 助教 (50433339) ; 田口 千恵子 日本大学, 松戸歯学部, 助手(専任扱) (80434091)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 低濃度フッ化物 / 間葉系幹細胞 / 老化

研究実績の概要

低濃度Fを添加した増殖中の細胞はトリプシン処理し分離され、DNAと細胞周期の解析はFACS解析にて評価した。間葉系幹細胞の細胞老化の評価にはSA-βgal 染色を用いた。倒立顕微鏡にて間葉系幹細胞を確認した。低濃度Fを添加した増殖中の間葉系幹細胞と老化間葉系幹細胞からRNA画分を回収し、GeneSpring GX softwareを用いてデータ解析を行なった。マイクロアレイデータ分析の促進や、特異遺伝子の発現量の変化を関連づけるIPA解析を行なった。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

計画書に沿った進行を行っているが、対象となる低濃度Fを添加した増殖中の間葉系幹細胞と老化間葉系幹細胞の作成やその系の立ち上げ等に時間を要しているため、計画書以上の進展はない。これら問題点は、これまでの各種検討により徐々に解決されていくと考えられるため、今後は更なる研究の進展が期待される。また、並行して進めている老化関連β-Galactosidase (SA-βgal)染色による間葉系幹細胞老化の評価においても、系の立ち上げ、検討に大きく時間を要しているが、こちらもこれまで検討を基に、今後研究が進展すると期待されている。
以上のことから、現在までの進捗状況は、計画書を大きく超えて進展するものではないものの、おおむね順調に進展しているものと判断している。

今後の研究の推進方策

低濃度フッ化物の骨芽細胞および破骨細胞における分化誘導や活性化に及ぼす影響の検討
12週齢のSAMP6マウスの大腿骨から採取した骨髄細胞を、10%PBS、50ng/mL M-CSF、15ng/mL RANKLを含むα-MEM培地で7日間培養し、低濃度F添加の有無による影響を解析する。骨芽細胞の活性化は、分化マーカーである1型コラーゲン、Alkaline Phosphatase (ALP)、Osteopontin (OPN)、 Osteocalcin (OCN)、Bone sialoprotein (BSP)、また、破骨細胞分化制御因子としてreceptor activator of nuclear factor-κB ligand (RANKL)、osteoprotegerin (OPG)、macrophage colony-stimulating factor (M-CSF)の発現をリアルタイムPCR法より評価する。破骨細胞の分化は、酒石酸抵抗性フォスファターゼ (TRAP) 染色およびPit Formation Assay法（SEM法）より解析する。また、破骨細胞活性化はウェスタンブロッティング法よりカテプシンK、MMP2、MMP9の発現を評価し、ゼラチンザイモ電気泳動よりMMP2、MMP9の活性化を評価する。なお、コントロールとしてSAMR1（正常老化マウス）を用いる。

研究成果

• [雑誌論文] Erosion by an Acidic Soft Drink of Human Molar Teeth Assessed by X-Ray Diffraction Analysis (2017)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Nasu Ikuo, Kono Tetsuro, Ootani Yukari, Kanno Takeshi, Tamamura Ryo, Kuwada-Kusunose Takao, Suzuki Kunihiro, Hirayama Tomohiko, Hirayama Tatsuya, Sakae Toshiro, Okada Hiroyuki
  • 雑誌名: Journal of Hard Tissue Biology 巻: 26(1) ページ: 81-85
  • 査読あり
• [雑誌論文] Immunohistological Study of the Major Salivary Glands in the Gray Short-Tailed Opossums(Monodelphis domestica (2017)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Tamamura Ryo, Kono Tetsuro, Ootani Yukari, Kanno Takeshi, Kuwada-Kusunose Takao, Suzuki Kunihiro, Sakae Toshiro, Okada Hiroyuki, Nasu Ikuo
  • 雑誌名: Journal of Hard Tissue Biology 巻: 26(1) ページ: 75-80
  • 査読あり
• [雑誌論文] 歯科診療室内の浮遊微粒子群が細胞に与える影響 (2017)
  • 著者名/発表者名: 田口千恵子、小林良喜、加藤志奈、有川量崇、内山敏一、那須郁夫
  • 雑誌名: 日大口腔科学 巻: 43(1) ページ: 35-40
  • 査読あり
• [雑誌論文] 日本人永久歯歯数のAge-Period-Cohort分析 歯科疾患実態調査による (2016)
  • 著者名/発表者名: 那須 郁夫、中村 隆
  • 雑誌名: 老年歯科医学 巻: 31(1) ページ: 39-50
  • 査読あり
• [雑誌論文] An Examination and Evaluation of Question Preparation for Computer-based Testing in Dental Education (2016)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Nishimura Hitoshi, Kageyama Makiko, Endo Hiroyasu, Wakami Masanobu, Tamamura Ryo, Okada Hiroyuki, Shimizu Takehiko, Hiratsuka Koichi, Kaneda Takashi, Hirayama Satoshi, Oomine Hirotaka, Matsushima Kiyoshi, Kawai Yasuhiko, Kasai Kazutaka, Shibutani Koh, Kawara Misao, Nasu Ikuo
  • 雑誌名: International Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 15(2) ページ: 46-53
  • 査読あり
• [雑誌論文] Correlation between Assignments for Professionalism of the Post-graduate Clinical Competency Evaluation and the Pre-graduate Objective Structured Clinical Achievement Test in Dental Education (2016)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Ito Takanori, Okamoto Yasuhiro, Uchida Takashi, Taguchi Chieko, Shimosaka Michiharu, Fuchigami Mana, Fukatsu Akira, Matsune Kensuke, Kono Yoshiharu, Matsushima Kiyoshi, Komiya Masamichi, Kasai Kazutaka, Shibutani Koh, Kawara Misao, Nasu Ikuo
  • 雑誌名: International Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 15(2) ページ: 40-45
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Study on the Occupational Stress of Trainee Dentists in Post-graduate Dental Education (2016)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Ito Takanori, Okamoto Yasuhiro, Uchida Takashi, Taguchi Chieko, Shimosaka Michiharu, Fuchigami Mana, Fukatsu Akira, Matsune Kensuke, Kono Yoshiharu, Sakamaki Tatsuo, Matsushima Kiyoshi, Komiya Masamichi, Kasai Kazutaka, Shibutani Koh, Kawara Misao, Nasu Ikuo
  • 雑誌名: International Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 15(2) ページ: 33-39
  • 査読あり
• [雑誌論文] An Examination of the Post-graduate Dental Clinical Competency Evaluation at the End of Clinical Training for Professionalism in Dental Education (2016)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Ito Takanori, Okamoto Yasuhiro, Uchida Takashi, Taguchi Chieko, Shimosaka Michiharu, Fuchigami Mana, Fukatsu Akira, Matsune Kensuke, Kono Yoshiharu, Matsushima Kiyoshi, Komiya Masamichi, Kasai Kazutaka, Shibutani Koh, Kawara Misao, Nasu Ikuo
  • 雑誌名: International Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 15(2) ページ: 29-32
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effectiveness of Computer-Based Testing Workshops in Dental Education (2016)
  • 著者名/発表者名: Gotouda Hiroya, Nishimura Hitoshi, Saito Masanori, Kimoto Suguru, Endo Hiroyasu, Wakami Masanobu, Tamamura Ryo, Okada Hiroyuki, Shimizu Takehiko, Hiratsuka Koichi, Kaneda Takashi, Hirayama Satoshi, Oomine Hirotaka, Matsushima Kiyoshi, Kawai Yasuhiko, Kasai Kazutaka, Shibutani Koh, Kawara Misao, Nasu Ikuo
  • 雑誌名: International Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 15(1) ページ: 17-21
  • 査読あり
• [学会発表] Differentiated embryo chondrocyte 1 (DEC1) is a novel negative regulator of hepatic fibroblast growth factor 21 (FGF21) in aging mice (2016)
  • 著者名/発表者名: Bhawal UK, Arikawa K, Taguchi C, Nakayama R, Nasu I, Arakawa H, Hiratsuka K
  • 学会等名: 第65回日本口腔衛生学会・総会; The 12th International Conference of Asian Academy of Preventive Dentistry : AAPD
  • 発表場所: 東京医科歯科大学 M&Dタワー 鈴木章夫記念講堂、東京、文京区
  • 年月日: 2016-05-27 – 2016-05-29
  • 国際学会
• [学会発表] MicroRNA expression profiling and inhibition of inflammation of Korean red ginseng extract in rats on kanamycin-induced hearing loss (2016)
  • 著者名/発表者名: Bhawal UK, Arikawa K, Taguchi C, Nakayama R, Nasu I, Arakawa H, Hiratsuka K
  • 学会等名: 第65回日本口腔衛生学会・総会; The 12th International Conference of Asian Academy of Preventive Dentistry : AAPD
  • 発表場所: 東京医科歯科大学 M&Dタワー 鈴木章夫記念講堂、東京、文京区
  • 年月日: 2016-05-27 – 2016-05-29
  • 国際学会
• [学会発表] DNA microarray and MicroRNA analysis in low-level laser therapy (LLLT)-treated diabetic rat salivary glands (2016)
  • 著者名/発表者名: Bhawal UK, Arikawa K, Taguchi C, Nakayama R, Nasu I, Arakawa H, Hiratsuka K
  • 学会等名: 第65回日本口腔衛生学会・総会; The 12th International Conference of Asian Academy of Preventive Dentistry : AAPD
  • 発表場所: 東京医科歯科大学 M&Dタワー 鈴木章夫記念講堂、東京、文京区
  • 年月日: 2016-05-27 – 2016-05-29
  • 国際学会
• [学会発表] 口内炎モデルラットによる水素水の治療および予防効果の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 竹内 麗理, 有川 量崇, 田口 千恵子, 中山 竜司, 平塚 浩一, 那須 郁夫
  • 学会等名: 第65回日本口腔衛生学会・総会
  • 発表場所: 東京医科歯科大学 M&Dタワー 鈴木章夫記念講堂、東京、文京区
  • 年月日: 2016-05-27 – 2016-05-29
• [学会発表] マウスにおける分泌型IgA抗体産生の概日リズム (2016)
  • 著者名/発表者名: 田口 千恵子, 小林 良喜, 有川 量崇, 中山 竜司, 落合 智子, 那須 郁夫
  • 学会等名: 第65回日本口腔衛生学会・総会
  • 発表場所: 東京医科歯科大学 M&Dタワー 鈴木章夫記念講堂、東京、文京区
  • 年月日: 2016-05-27 – 2016-05-29
• [学会発表] う蝕リスク診断におけるハイリスク者選別の評価法の比較検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 後藤田 宏也, 田口 千恵子, 生田 明敏, 桑原 紀子, 松根 健介, 平塚 浩一, 河野 善治, 松村 淳, 那須 郁夫
  • 学会等名: 第65回日本口腔衛生学会・総会
  • 発表場所: 東京医科歯科大学 M&Dタワー 鈴木章夫記念講堂、東京、文京区
  • 年月日: 2016-05-27 – 2016-05-29