| 研究実績の概要 |
ヒト損傷トレランス機構には二つの副経路、忠実度が低い(error-prone)損傷乗り越えDNA合成(translesion DNA synthesis, TLS)と、忠実度が高い(error-free)鋳型鎖交換反応を介したtemplate switch (TS)経路が存在し、PCNAのユビキチン化により制御される。PCNAのモノユビキチン化はTLS (error-prone)を、ポリユビキチン化はTS (error-free)を促進することから、その制御は遺伝的安定性の維持にとって極めて重要である。酵母ではPCNAのモノ/ポリユビキチン化による制御機構の概念が確立しているが、ヒト細胞ではポリユビキチン化がほとんど検出されないため、その制御機構は不明な点が多い。本研究ではこの現状を打破するため、斬新な脱ユビキチン酵素を同定、解析することによって、ヒトでの損傷トレランス制御機構の解明を目指している。
これまでの研究から、ユビキチン化PCNAを基質とする様々なタイプの脱ユビキチン酵素をHeLa細胞抽出液中に同定している（未発表）。昨年までの研究から、同定された脱ユビキチン酵素をコードする遺伝子と、その調節因子をコードする遺伝子を同定し、組み換えタンパク質の解析を行った。
本年度は、これらの遺伝子を破壊したヒト培養細胞を樹立し、様々なDNA損傷に対する応答を解析した。また、ヒト損傷トレランス経路の様々な遺伝子の破壊株やノックダウンを組み合わせることで、本研究で同定した脱ユビキチン酵素の生理機能を解析した。
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