CRISPR/hCas9法による抗原特異的T細胞欠損マウスの作製と評価

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K14591
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 渡会 浩志 東京大学, 医科学研究所, 特任准教授 (70415339)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: CRISPR/Cas9 / iNKT細胞 / 肥満

研究実績の概要

新しいゲノム編集技術であるCRISPR/Cas9法を用いて、Traj18欠損マウス（CRISPR-Traj18-/-）の樹立に成功した。従来のESへのgene targeting法によって樹立されたTraj18欠損マウスは、Traj18のみならずその上流のTrajの発現も認められず、T細胞レパトアが60％減っていたが、RNA-seq解析の結果、CRISPR-Traj18-/-のT細胞レパトアは正常で、抗原提示分子CD1d拘束性のインバリアント・ナチュラルキラーT（iNKT）細胞特異的欠損マウスの樹立に成功したことを明らかとした。iNKT細胞の肥満における影響を明らかにするため、高脂肪食負荷による役割を検証した。その結果、CRISPR-Traj18-/-マウスでは野生型マウスと比べて体重の増加、インスリン抵抗性、グルコース応答性の減弱が認められ、iNKT細胞が肥満やそれに伴うⅠ型糖尿病の増悪に寄与していることを明らかとした。これまでの知見ではCd1dKOでは上述と同じ結果であるが、Traj18欠損マウスでは野生型とほぼ同等の結果が得られていたことから、CD1d拘束性でiNKT細胞ではないtype II NKT細胞が増悪に寄与していると考えられてきたが、これについて再考する必要があるという結果が得られた。本研究はScientific Report誌にアクセプトされた。

研究成果

• [雑誌論文] Ultrafast confocal fluorescence microscopy beyond the fluorescence lifetime limit (2018)
  • 著者名/発表者名: Mikami Hideharu、Harmon Jeffrey、Kobayashi Hirofumi、Hamad Syed、Wang Yisen、Iwata Osamu、Suzuki Kengo、Ito Takuro、Aisaka Yuri、Kutsuna Natsumaro、Nagasawa Kazumichi、Watarai Hiroshi、Ozeki Yasuyuki、Goda Keisuke
  • 雑誌名: Optica 巻: 5 ページ: 117～126
  • DOI: 10.1364/OPTICA.5.000117
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Generation and validation of novel anti-bovine CD163 monoclonal antibodies ABM-1A9 and ABM-2D6 (2018)
  • 著者名/発表者名: Shimamoto Yoshinori、Nio-Kobayashi Junko、Watarai Hiroshi、Nagano Masashi、Saito Natsuko、Takahashi Eiki、Higuchi Hidetoshi、Kobayashi Atsushi、Kimura Takashi、Kitamura Hiroshi
  • 雑誌名: Veterinary Immunology and Immunopathology 巻: 198 ページ: 6～13
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2018.02.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] The role of plasmin in the pathogenesis of murine multiple myeloma (2017)
  • 著者名/発表者名: Eiamboonsert Salita、Salama Yousef、Watarai Hiroshi、Dhahri Douaa、Tsuda Yuko、Okada Yoshio、Hattori Koichi、Heissig Beate
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 488 ページ: 387～392
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.05.062
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] IL-22BP dictates characteristics of Peyer’s patch follicle-associated epithelium for antigen uptake (2017)
  • 著者名/発表者名: Jinnohara Toshi、Kanaya Takashi、Hase Koji、Sakakibara Sayuri、Kato Tamotsu、Tachibana Naoko、Sasaki Takaharu、Hashimoto Yusuke、Sato Toshiro、Watarai Hiroshi、Kunisawa Jun、Shibata Naoko、Williams Ifor R.、Kiyono Hiroshi、Ohno Hiroshi
  • 雑誌名: The Journal of Experimental Medicine 巻: 214 ページ: 1607～1618
  • DOI: 10.1084/jem.20160770
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Analyses of a Mutant Foxp3 Allele Reveal BATF as a Critical Transcription Factor in the Differentiation and Accumulation of Tissue Regulatory T Cells (2017)
  • 著者名/発表者名: Hayatsu Norihito、Miyao Takahisa、Tachibana Masashi、Murakami Ryuichi、Kimura Akihiko、Kato Takako、Kawakami Eiryo、Endo Takaho A.、Setoguchi Ruka、Watarai Hiroshi、Nishikawa Takeshi、Yasuda Takuwa、Yoshida Hisahiro、Hori Shohei
  • 雑誌名: Immunity 巻: 47 ページ: 268～283.e9
  • DOI: 10.1016/j.immuni.2017.07.008
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] A Novel Mouse Model of iNKT Cell-deficiency Generated by CRISPR/Cas9 Reveals a Pathogenic Role of iNKT Cells in Metabolic Disease (2017)
  • 著者名/発表者名: Ren Yue、Sekine-Kondo Etsuko、Shibata Risa、Kato-Itoh Megumi、Umino Ayumi、Yanagida Ayaka、Satoh Masashi、Inoue Komaki、Yamaguchi Tomoyuki、Mochida Keiichi、Nakae Susumu、Van Kaer Luc、Iwabuchi Kazuya、Nakauchi Hiromitsu、Watarai Hiroshi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 ページ: 12765
  • DOI: 10.1038/s41598-017-12475-4
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] Differential role of CD1d in the development and functional acquisition of invariant natural killer T cell subtypes. (2017)
  • 著者名/発表者名: Hiroshi Watarai
  • 学会等名: 7th International Workshop of Kyoto T Cell Conference
  • 国際学会
• [学会発表] Obesity Study by Using a Novel Mouse Model of Invariant Natural Killer T Cell-deficiency Generated by CRISPR/Cas9. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yue Ren, Hiroshi Watarai
  • 学会等名: International Symposium of the Institute Network
  • 国際学会
• [学会発表] High-speed stimulated Raman scattering microscopy for studying the metabolic diversity of motile Euglena gracilis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yuta Suzuki, Yoshifumi Wakisaka, Osamu Iwata, Ayaka Nakashima, Takuro Ito, Misa Hirose, Ryota Domon, Mai Sugawara, Norimichi Tsumura, Hiroshi Watarai, Tomoyoshi Shimobaba, Kengo Suzuki, Keisuke Goda, Yasuyuki Ozeki.
  • 学会等名: SPIE BiOS
  • 国際学会
• [学会発表] A novel mouse model of iNKT cell deficiency generated by CRISPR/Cas9 reveals a pathogenic role of iNKT cells in metabolic disease. (2017)
  • 著者名/発表者名: Hiroshi Watarai
  • 学会等名: International Symposium on CD1-MR1 2017.
  • 国際学会
• [学会発表] A Novel Mouse Model of iNKT Cell-deficiency Generated by CRISPR/Cas9 Technology Reveals a Pathogenic Role of iNKT Cells in Metabolic Disease. (2017)
  • 著者名/発表者名: 任月、近藤悦子、柴田理沙、渡会浩志
  • 学会等名: 第10回セラミド研究会学術集会
• [学会発表] A Novel Mouse Model of iNKT Cell-deficiency Generated by CRISPR/Cas9 Technology Reveals a Pathogenic Role of iNKT Cells in Metabolic Disease. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yue Ren, Etsuko Sekine-Kondo, Risa Shibata, Hiroshi Watarai.
  • 学会等名: 第46回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Euglena gracilisの貯蔵多糖パラミロンの免疫制御の機序の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 中島綾香、永澤和道、任月、大湖菜央子、鈴木健吾、渡会浩志
  • 学会等名: 第71回日本栄養・食糧学会大会
• [学会発表] 抗ウシCD163モノクローナル抗体の樹立 (2017)
  • 著者名/発表者名: 齊藤 菜津子、嶋本 良則、小林 純子、永野 昌志、渡会 浩志、北村 浩
  • 学会等名: 第150回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] CRISPR/Cas9技術を用いたモノ及びジカルボン酸トランスポーター欠損マウスの作製とその疫学的・生化学的解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 山田裕貴、長谷耕二、渡会浩志
  • 学会等名: ConBio2017