| 研究課題/領域番号 |
16K14652
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
藤原 俊伸 近畿大学, 薬学部, 教授 (80362804)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | RNAアプタマー |
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| 研究実績の概要 |
cap構造の合成方法は、真菌と高等真核生物では異なる。真菌では、RNAトリホスファターゼであるCet1（TPase）と、グアニル酸転移酵素であるCeg1（GTase）という２つの異なるタンパク質が結合することで１つの酵素として機能し、キャップ構造を合成する。一方、ヒトでは、２つの機能を持つ１つのタンパク質がキャップ構造を合成する。従って、Cet1のTPase活性阻害物質、Ceg1のGTase活性阻害物質、Cet1とCeg1の結合阻害物質の探索・創製は、有効な抗真菌薬候補の発見につながると考えられる。また、藤原は酵母を用いた遺伝学によりCet1とCeg1との結合を阻害することで、成熟mRNAを合成できず、死に至ることを証明している。
今年度はCet1組換えタンパク質を用いた抗Cet1アプタマーの取得を試みた。その結果Cet1に高い親和性を有し、かつCet1の機能を強力に阻害するRNAアプタマー配列を得ることができた。そのCet1に対する親和性はnMオーダーの解離定数を示した。さらにCet1の有するTPase活性に対する阻害能力は既存の阻害試薬であるスラミンと比較して100倍以上低い濃度でIC50を示した。現在、ヒトのキャッピング酵素を活性のある組換えタンパク質として調製を試みており、ヒトのキャッピング反応に対する影響を検討しているところである。
さらに、Cegとの結合阻害を示すアプタマー取得を開始した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
Cet1に高い親和性を有し、かつCet1の機能を強力に阻害するRNAアプタマーを得ることができたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、ヒトのcapping酵素を阻害しないことを確認する予定である。さらに、Cegに対するRNAアプタマー候補を得ており、このRNAプールの中からCet1との結合を阻害するものを選択する予定である
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| 次年度使用額が生じた理由 |
これまで蓄積されてきた研究成果の報告と次年度実施の準備に注力したため、物品を新たに購入する必要が無かったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
薬品・キット類に使用する。
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