| 研究課題/領域番号 |
16K14881
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| 研究機関 | 東京工業大学 |
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研究代表者 |
平沢 敬 東京工業大学, 生命理工学院, 准教授 (20407125)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 微生物 / 有用物質生産 / 定常期 |
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| 研究実績の概要 |
微生物を用いた有用物質生産において、宿主細胞の増殖が停止する定常期で目的物質を生産させる手法は、投入した炭素源や窒素源などの資源を効率よく目的物質生産に利用することができる技術として注目を浴びている。本研究では、微生物細胞による定常期での有用物質生産技術の開発に向け、培養液に添加するだけで微生物細胞を定常期へと導き、かつ増殖が停止しても目的物質生産のための糖代謝活性を維持させることを可能にする化合物を探索する実験系を構築する。そして、実際に化合物の探索を行い、探索された化合物がどのような作用機作で微生物細胞を定常期へと導くのかを解明するとともに、有用物質生産への効果を検証する。
微生物細胞を定常期へと導き、かつ増殖が停止しても目的物質生産のための糖代謝活性を維持させる化合物の探索に向けて、探索に用いる検定菌を構築する必要がある。本研究では、糖代謝活性に連動して発現する遺伝子のプロモーターの下流にβ-ガラクトシダーゼをコードするlacZ遺伝子などのレポーター遺伝子を連結し、微生物細胞に導入することで構築した組換え株を検定菌として用いる。
このような検定菌の構築に向けて、平成28年度は定常期における細胞の糖代謝活性に連動して発現する糖代謝関連遺伝子の同定に着手した。すなわち、大腸菌において、炭素源の取り込みにかかわるタンパク質や解糖系の酵素をコードする遺伝子のプロモーター配列にlacZ遺伝子を連結させた遺伝子を持つ低コピープラスミドのプラスミドの構築に着手した。また、化合物の探索に向け、土壌から放線菌を分離する実験を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
化合物探索に用いる検定菌の構築に向け、大腸菌において炭素源の取り込みかかわるタンパク質や解糖系の酵素をコードする遺伝子のプロモーター配列にレポーター遺伝子を連結させた遺伝子を持つプラスミドのプラスミドの構築には着手したが、実際の培養系におけるプロモーターの活性の測定を行うには至らなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
プラスミドの構築を速やかに進めるとともに、構築したプラスミドを導入した大腸菌を用いた培養実験を行い、定常期における糖代謝活性に連動して発現される遺伝子のプロモーターの同定を行う。そして、微生物細胞の糖代謝活性は維持しつつ増殖を定常期へと導く化合物の探索を開始する。
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