| 研究課題/領域番号 |
16K14987
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
北野 健 熊本大学, 大学院先端科学研究部(理), 准教授 (40336219)
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| 研究分担者 |
吉崎 悟朗 東京海洋大学, 学術研究院, 教授 (70281003)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | ゲノム編集 / ノックアウト |
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| 研究実績の概要 |
メダカにおいて簡易型CRISPR/CASシステムによるF0世代でのノックアウト技術を確立するため、生殖細胞形成に関与するdead end遺伝子に対するガイドRNAとCAS9タンパク質をメダカ胚の1細胞期に顕微注入した。その結果、顕微注入した個体の生殖細胞数を計数したところ、全ての個体で生殖細胞が完全に消失していた。また、顕微注入した個体における遺伝子変異パターンをゲノムPCR及びシークエンス解析したところ、調べた全ての個体で変異が検出された。以上の結果から、本研究条件により、高効率でF0ノックアウトメダカを作製できることが明らかとなった。
次に、養殖魚種におけるこのシステムを確立するため、ニジマスのメラニン合成に関わるslc45a2遺伝子に対するガイドRNAを合成してCAS9タンパク質とともにニジマス胚へと顕微注入したところ、得られた胚で高効率で黒色素の欠損が確認された。これらの個体についてT7ヌクレアーゼを用いて突然変異の有無を解析した結果、体色変異を示したすべての個体で遺伝子配列の欠損、あるいは挿入が確認された。以上のように、合成RNAとCAS9タンパク質を用いたシステムにより、水産有用淡水魚であるニジマスにおいてもF0世代で表現型を得られることが明らかとなった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
実験計画していたモデル魚（メダカ）と養殖魚（ニジマス）において、両方ともに高効率でF0ノックアウト個体を作製できたため、研究は順調に進展していると考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、確立した簡易型CRISPR/CASシステムを、海産魚であるヒラメやサバ科魚類にも応用するための技術開発を進めていく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予想よりも少ないガイドRNAを合成することで、簡易型CRISPR/CASシステムを確立できたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
より多くのガイドRNAを合成して、海産魚における簡易型CRISPR/CASシステムを確立する
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