|
本研究では、新奇の革新的RNAテクノロジーであるCRISPR/FnCas9システムを動物のウイルス感染症治療へ応用する。この目的のため、ウイルスベクターとCRISPR/FnCas9システムを融合させる独自の方法を新たに開発し、これまで困難とされるRNAウイルス感染症、具体的には鳥インフルエンザの制御を目指す。これらの成果は、新しい抗インフルエンザ戦略としてのブレイクスルーとなる方法論を提供することが期待される。
本年度は、CRISPR/FnCas9システムに必須となるrgRNAとFnCas9をそれぞれ発現するインフルエンザウイルスベクターをリバースジェネティクス法によって作製することを試みた。これら組み換えウイルスが構築できれば、これらを鳥インフルエンザウイルスに感染した動物に直接投与するという方法で、感染したインフルエンザウイルスのゲノムRNAをダイレクトに切断することにより、ウイルス増殖を抑制する、つまり鳥インフルエンザを制御できることが期待される。
今回、インフルエンザウイルスのHA分節にこれらを搭載する組み換えウイルス。およびNA分節にこれらを搭載する組み換えウイルスなど、複数のコンストラクトを試してみた。その結果、いくつかの組み換えウイルスがレスキューできたものの、挿入配列の欠失が認められ、意図する組み換えウイルスは得られなかった。そこでレトロウイルスベクターを用いて同様な組み換え体の作出を試みたものの、やはり安定した組み換え体の作出はできなかった。挿入配列がベクターウイルスの増殖に何らかの影響を及ぼしていることが考えられた。
|
