|
体細胞から人工多能性幹細胞（iPS細胞）への形質転換時における細胞不死化はテロメア伸長に関わるTERT遺伝子の発現獲得と大きく関係している。我々はヒトTERTプロモーターの遠位領域にヒト多能性幹細胞特異的DNAメチル化可変領域（TERT-DMR）を同定したが、ヒトiPS細胞樹立時におけるTERT-DMRと発現獲得機構の関連については明らかとなっていない。本年度では、昨年度に蓄積した結果を基にさらにTERT遺伝子のエピジェネティック発現制御機構の解明を進めた。TERT-DMR特異的メチル化コンストラクトを作成し、TERT-DMR特異的メチル化コンストラクトを用いたレポーターアッセイをヒトiPS細胞3株と体細胞を用いて実施し、TERT-DMRのDNAメチル化による発現活性への影響を明らかにした。また、TERT-DMRおよび転写開始点近傍におけるクロマチン構造を解析するために、ヒトES細胞および、体細胞のATAC-Seqデータを用いたin silicoによる解析を行った結果、ヒトiPS細胞におけるTERT-DMRは高メチル化状態であるのにかかわらずオープンクロマチンであることを明らかにした。さらにTERT遺伝子と同様のDNAメチル化と発現パターンを示す遺伝子を、網羅的メチル化データと発現データを用いたin silico解析により探索した結果、ヒトiPS細胞においてTERT遺伝子の他に高メチル化、高発現をする遺伝子をいくつか同定した。
|
