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クルーズトリパノソーマが引き起こすシャーガス病は、感染を維持しながら長い無症状期（数年～数十年）を経て慢性期へと移行し最終的に患者を死に至らしめる。しかしながら、なぜ長期間排除されずに感染し続けるのかは全くわかっていない。本研究は、申請者らが誘導に成功した“シスト”について、その内部構造、代謝基盤、誘導因子等を種々の解析を用いて明らかにし、クルーズトリパノソーマの「休眠」というこれまで未知の現象が慢性シャーガス病の原因であることを示すことを目的とする。これまでの研究から、コンカナバリンA（ConA）で72時間処理した上鞭毛期型原虫の透過型電子顕微鏡観察によって、最初に原虫内部に空胞が形成されそれを取り囲むシスト壁でオルガネラの分裂が複数回起こること、分裂したオルガネラが集合して娘細胞が形成されそれがシスト内腔に遊離することが明らかとなった。また、メタボローム解析によって、シスト形成が進むにつれてアデニン量が著しく上昇（60倍以上）すること、ATP/ADP比が著しく低下することを見出した。これらの結果は、シストにおいて代謝活性が低下していることを強く示唆している。本年度は、ConAと結合する原虫分子の探索を行なった。これまでの研究から、蛍光標識ConAを用いた免疫蛍光染色を行なうと原虫の鞭毛と鞭毛基部にConAが強く結合していることが強く示唆されている。そこで、原虫シストの破砕液を磁気ビーズ結合ConAと反応させたのちに磁気ビーズを回収し、ConA結合タンパクのプロテオーム解析を行なったところ、ConAは微小管タンパクであるチューブリンα/βサブユニットおよび原虫の主要なシステインプロテアーゼ、クルジパインcruzipainと結合することが強く示唆された。
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