ネフリンレポーターマウスを用いた新規ポドサイト保護薬の探索

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K15469
• 研究機関: 静岡県立大学
• 研究代表者: 森 潔 静岡県立大学, 薬学部, 特任教授 (60343232)
• 研究分担者: 松阪 泰二 東海大学, 付置研究所, 助教授 (50317749)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 腎臓内科学 / 糸球体 / ポドサイト / 化合物ライブラリー / スクリーニング / レポーターアッセイ

研究実績の概要

前年度、ROSA遺伝子座を用いてnephrinプロモーター配列下にEGFPを発現するNephrin-EGFP knock-inマウスの作出に成功した。またマウス由来糸球体の培養系を用いてArrayscanによるEGFPレポーターの発現強度を定量する実験系を確立した。
今回、ビタミンＤが単離糸球体においてnephrin mRNA、nephrin protein、EGFP reporterの発現を大きく増大させることを確認し、本実験系によりnephrinの発現を増大させる因子をスクリーニングできることを確認した。そこで京都大学大学院医学研究科・医学研究支援センターより化合物ライブラリーの供与を受け、96 well plateを用いてnephrin reporter活性を増強する化合物のスクリーニングを行った。まずPrestwick Chemical、Calbiochem、Selleck Chemicalsの３社が保有する市販化合物のスクリーニングを行うと、強陽性、弱陽性を呈する多くのシグナルを得た。ビタミンＤを陽性コントロールとしてヒット化合物の濃度を1/10、1/100に減らして再現性を検討するとビタミンＤの効果は濃度依存性が小さいものの、強陽性ヒット化合物ではシグナルが1/10に減弱しており、元化合物を肉眼で見ると黄色やオレンジ色を呈しており、レポーター蛍光ではなく化合物自体のシグナルを検出している偽陽性であることが判明した。次に765化合物のスクリーニングを行ったところ、40個の陽性化合物を得た。二次スクリーニングを行うと4個の化合物によりnephrin mRNA発現が2倍以上に増加した。スクリーニングの規模を拡大すると共に、化合物の全身投与により、個体レベルで(病的)糸球体におけるnephrin発現を増加させるものがあるか今後も検討を進める。

研究成果

• [雑誌論文] Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy (2017)
  • 著者名/発表者名: Mori Keita P.、Yokoi Hideki、Kasahara Masato、Imamaki Hirotaka、Ishii Akira、Kuwabara Takashige、Koga Kenichi、Kato Yukiko、Toda Naohiro、Ohno Shoko、Kuwahara Koichiro、Endo Tomomi、Nakao Kazuwa、Yanagita Motoko、Mukoyama Masashi、Mori Kiyoshi
  • 雑誌名: Journal of the American Society of Nephrology 巻: 28 ページ: 278～289
  • DOI: 10.1681/ASN.2015101168
  • 査読あり
• [雑誌論文] Obesity-promoting and anti-thermogenic effects of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in mice (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishii Akira、Katsuura Goro、Imamaki Hirotaka、Kimura Hiroyuki、Mori Keita P.、Kuwabara Takashige、Kasahara Masato、Yokoi Hideki、Ohinata Kousaku、Kawanishi Tomoko、Tsuchida Junichi、Nakamoto Yuji、Nakao Kazuwa、Yanagita Motoko、Mukoyama Masashi、Mori Kiyoshi
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 ページ: 15501～15501
  • DOI: 10.1038/s41598-017-15825-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crucial Role of Mesangial Cell-derived Connective Tissue Growth Factor in a Mouse Model of Anti-Glomerular Basement Membrane Glomerulonephritis (2017)
  • 著者名/発表者名: Toda Naohiro、Mori Kiyoshi、Kasahara Masato、Ishii Akira、Koga Kenichi、Ohno Shoko、Mori Keita P.、Kato Yukiko、Osaki Keisuke、Kuwabara Takashige、Kojima Katsutoshi、Taura Daisuke、Sone Masakatsu、Matsusaka Taiji、Nakao Kazuwa、Mukoyama Masashi、Yanagita Motoko、Yokoi Hideki
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 ページ: 42114～42114
  • DOI: 10.1038/srep42114
  • 査読あり
• [雑誌論文] Glomerulosclerosis Induced by Deficiency of Membrane-Associated Guanylate Kinase Inverted 2 in Kidney Podocytes (2017)
  • 著者名/発表者名: Shirata Naritoshi、Ihara Kan-ichiro、Yamamoto-Nonaka Kanae、Seki Takuto、Makino Shin-ichi、Oliva Trejo Juan Alejandro、Miyake Takafumi、Yamada Hiroyuki、Campbell Kirk Nicholas、Nakagawa Takahiko、Mori Kiyoshi、Yanagita Motoko、Mundel Peter、Nishimori Katsuhiko、Asanuma Katsuhiko
  • 雑誌名: Journal of the American Society of Nephrology 巻: 28 ページ: 2654～2669
  • DOI: 10.1681/ASN.2016121356
  • 査読あり
• [雑誌論文] Natriuretic peptide receptor guanylyl cyclase-A pathway counteracts glomerular injury evoked by aldosterone through p38 mitogen-activated protein kinase inhibition (2017)
  • 著者名/発表者名: Kato Yukiko、Mori Kiyoshi、Kasahara Masato、Osaki Keisuke、Ishii Akira、Mori Keita P.、Toda Naohiro、Ohno Shoko、Kuwabara Takashige、Tokudome Takeshi、Kishimoto Ichiro、Saleem Moin A.、Matsusaka Taiji、Nakao Kazuwa、Mukoyama Masashi、Yanagita Motoko、Yokoi Hideki
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 ページ: 46624～46624
  • DOI: 10.1038/srep46624
  • 査読あり
• [雑誌論文] 腎臓病ガイドライン総まとめ：低用量カルペリチド (2017)
  • 著者名/発表者名: 森 潔、山田博之
  • 雑誌名: 月刊薬事 . 株式会社じほう (東京) 巻: 59 ページ: 40～43
• [学会発表] NEW CONCEPT CONCERNING THE MECHANISM OF ALBUMINURIA IN THE EARLY STAGE OF DIABETIC NEPHROPATHY: INCREASED GLOMERULAR FILTRATION WITH PARTIAL COMPENSATION BY INCREASED TUBULAR REABSORPTION (2017)
  • 著者名/発表者名: Keita P. Mori, Hideki Yokoi, Masato Kasahara, Takashige Kuwabara, Hirotaka Imamaki, Akira Ishii, Kazuwa Nakao, Motoko Yanagita, Masashi Mukoyama, and Kiyoshi Mori
  • 学会等名: 54TH ERA-EDTA CONGRESS
  • 国際学会
• [学会発表] Crucial Role of Mesangial Cell-derived Connective Tissue Growth Factor in Anti-Glomerular Basement Membrane Glomerulonephritis (2017)
  • 著者名/発表者名: Hideki Yokoi, Naohiro Toda, Kiyoshi Mori, Masato Kasahara, Akira Ishii, Keita P. Mori, Takashige Kuwabara, Taiji Matsusaka, Masashi Mukoyama, Motoko Yanagita
  • 学会等名: 54TH ERA-EDTA CONGRESS
  • 国際学会
• [学会発表] 2017年尿中NGALの保険適応により、日本のAKI診療は変わるのか (2017)
  • 著者名/発表者名: 森 潔
  • 学会等名: 第60回日本腎臓学会学術総会
• [備考] 静岡県立大学教員データベース・教員情報詳細・森 潔
  • URL: http://db.u-shizuoka-ken.ac.jp/show/prof656.html