| 研究課題/領域番号 |
16K15728
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
石田 晋 北海道大学, 医学研究院, 教授 (10245558)
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| 研究分担者 |
西村 紳一郎 北海道大学, 先端生命科学研究院, 教授 (00183898)
野田 航介 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (90296666)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 血管内皮増殖因子受容体-2 / 糖鎖 / 糖尿病網膜症 / 低酸素 |
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| 研究実績の概要 |
近年、核酸、蛋白質に続く第三の鎖状生命分子として糖鎖分子が注目されており、糖鎖構造の変化が蛋白機能に影響を与えることが明らかとなっている。また、糖尿病網膜症の病態には血管内皮増殖因子(VEGF)が関与しており、その受容体であるVEGFR-2上の糖鎖構造を明らかにすることは糖尿病の疾患関連糖鎖の発見に繋がる可能性がある。
今年度は、糖尿病網膜症の主病態である低酸素条件下でヒト網膜血管内皮細胞におけるVEGFR-2の糖鎖構造に変化が生じるかについて検討した。通常酸素および低酸素条件下で培養した細胞抽出液からVEGFR-2を免疫沈降法により単離し、酵素によるN型糖鎖の切断、ビーズによる糖鎖の捕捉、標識試薬との交換を行い糖鎖の回収を行った。その後、質量分析によって得られたスペクトルについてデータベースに照合して糖鎖構造の推定を行った。
結果として、主に検出された糖鎖構造は通常酸素および低酸素条件下で変化しなかった。最も多い糖鎖構造は(Hex)1(HexNAc)2(Deoxyhexose)1+(Man)3(GlcNAc)2、２番目は(Hex)2(HexNAc)2(Deoxyhexose)1+(Man)3(GlcNAc)2、３番目は(HexNAc)2(Deoxyhexose)1+(Man)3(GlcNAc)2という3種類の糖鎖構造が推定された。
現在、免疫沈降後の細胞抽出液に対してウエスタンブロッティングを行い、VEGFR2と推定している250kDのバンド切り出し、液体クロマトグラフィータンデム質量分析装置による解析をおこない、免疫沈降法によるVEGFR2の単離精度を確認する検討を行っている。
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