| 研究課題/領域番号 |
16K15853
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
天野 敦雄 大阪大学, 歯学研究科, 教授 (50193024)
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| 研究分担者 |
竹内 洋輝 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (40572186)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | Porphyromonas gingivalis / 歯周病 / 細胞内寄生 / Rab14 / RalA / VAMP２ |
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| 研究実績の概要 |
歯周病菌Porphyromonas gingivalisはバイオフィルムのみならず、口腔の細胞内に生息して口腔内定着を果たしている。本研究課題は、細胞内定着に関わる宿主分子基盤の解析を目的としている。平成28年度の目標は、ゴルジ体からの膜小胞の輸送を制御するRab GTPase の1つであるRab14 につき、ヒト歯肉上皮細胞へ侵入したP. gingivalisの細胞内動態に及ぼす影響を調べることであった。蛍光蛋白質EGFP とRab14 の融合蛋白質を歯肉上皮細胞へ発現させ、細胞内に侵入したP. gingivalis との共局在率を共焦点顕微鏡で観察した結果、歯肉上皮細胞に侵入した歯周病菌Porphyromonas gingivalis がRab GTPase であるRab14 およびアクチン細胞骨格系を制御する低分子量GTPase の１つであるRalA と共局在を示すことが示された。
そこで平成29 年度は、RalA 遺伝子につき解析を加えた。蛍光蛋白質mCherry とRalA の融合蛋白質を歯肉上皮細胞へ発現させ、細胞内に侵入したP. gingivalis との共局在率を共焦点顕微鏡で観察した結果、感染後5時間までに本菌とmCherry-RalAはよく共局在を示した。P. gingivalis を感染させた歯肉上皮細胞をRabAの阻害剤であるBQU57 およびRBC8 で処理し共焦点顕微鏡で観察すると、感染後4 時間において対照群と比較し歯肉上皮細胞内の菌数が増加した。また、その大部分が初期エンドソームのマーカーであるEGFP-FYVE と共局在を示した。これらの結果より、RalA の活性化がP. gingivalis の初期エンドソームを経由した細胞内輸送に関与することが示唆された。
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