研究課題/領域番号 |
16K18461
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研究機関 | 近畿大学 |
研究代表者 |
吉田 健史 近畿大学, 医学部附属病院, 助教 (40548632)
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研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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キーワード | 分子標的治療 / 薬剤耐性 / 非小細胞肺癌 |
研究実績の概要 |
(1)背景:EGFR陽性非小細胞肺癌に対してはEGFR阻害薬が著効するが、治療後のT790M耐性遺伝子の獲得による腫瘍の再燃が臨床的な問題となっている。我々は以前の研究で、SrcがT790M存在下におけるco-driverとして重要であることを確認した。方法:EGFR T790M陽性非小細胞肺癌細胞株を用いて、第三世代EGFR-TKIであるASP8273およびオシメルチニブとSrc阻害薬ダサチニブの併用効果についてcell viability assay、immunoblotting、annexin-V binding assay、xenograft modelを用いて検討した。結果:ダサチニブはASP8273およびオシメルチニブとの併用において単剤と比較して相乗的な細胞増殖抑制効果を示し、annexin陽性アポトーシス細胞を有意に増加させた。ダサチニブとオシメルチニブの併用はin vivoにおいても単剤と比較して有意に腫瘍増殖を抑制した。Immunoblotting assayによって両者の併用がSrcおよびEGFR下流のAkt・Erkの活性化を抑制し、またアポトーシス制御蛋白であるBcl-xLの発現を低下させ、PARPおよびcaspase-3の開裂をもたらすことが示された。結論:ダサチニブはSrcの抑制を介してBcl-xLを低下させアポトーシスを誘導することで、T790M陽性肺癌細胞株においてASP8273およびオシメルチニブの抗腫瘍効果を増強させることが示唆された。今後、臨床試験における第三世代EGFR-TKIとSrc阻害薬の併用効果の検証が待たれる。
(2)T790M 耐性遺伝子を持つ肺癌細胞(PC9GR・H1975 細胞など)に第3世代(T790M 選択的)EGFR-TKIASP8273 を低濃度から徐々に濃度を上げながら暴露させ、3 か月以上継代を継続する事でこれらの薬剤に対する耐性細胞株を樹立した。また今後非小細胞肺癌の1 次治療から第3世代EGFR-TKI を用いる事も想定し、EGFR 遺伝子変異Ex19 陽性かつT790M 陰性(EGFR-TKI 獲得耐性なし)であるPC9 細胞からも同様の手法を用いて第3世代EGFR-TKI 耐性株を樹立した。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究実績の概要に記載の研究結果(1)は既に国際誌に論文出版がなされており、現在までの研究の進捗状況は計画に対しおおむね順調に進んでいるといえる。
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今後の研究の推進方策 |
研究実績の概要に記載の研究結果(2)に記載した、樹立したASP8273 耐性株(PC9-ASPR、PC9GR-ASPR、H1975 ASPR)はシングルセルクローニングを行った後に、リン酸化プロテオミクス(Yoshida et al. Clinical Cancer Research 2014. 20(15):4059-74)を中心にRTKスクリーニング、次世代シークエンスなど様々な手法を必要に応じて用いながら耐性機序の網羅的解析を行う。また得られたデータはバイオインフォマティクスの手法を用いて整理する。これらの方法により耐性に関わる分子の候補が見つかれば、その分子標的が実際のEGFR-TKI 耐性肺癌患者においても発現しているか否かを、組織検体を用いた免疫染色等を用いて確認する。また、耐性株においてその分子の阻害薬やSiRNA などを用いて耐性機序の解明や耐性克服の治療戦略の開発を行う。
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