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2018 年度 実績報告書

生体金属イオンシグナルによる新規サイトカイン産生制御機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 16K18518
研究機関金沢医科大学

研究代表者

和田 俊樹 (矢部俊樹)  金沢医科大学, 医学部, 講師 (10451634)

研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
キーワードサイトカイン / 蛋白質輸送 / 膜蛋白質
研究実績の概要

Toll-like receptor(TLR)は,病原体由来の共通パターン分子(PAMPs)を認識するパターン認識受容体として自然免疫系において重要な役割を担う.これまで,TLRによる炎症性サイトカイン遺伝子の発現機構の研究は精力的に行われてきたが,サイトカイン蛋白質の分泌制御に関しては不明な点が多く残されている.本研究では,IFN-αの細胞外への分泌を担うキャリア分子として同定したSortilinのサイトカインキャリア分子としての機能の詳細及びその発現制御機構を明らかにする.
本年は,昨年度行ったSPR解析による物理学的相互作用の解析から同定されたSortilin新規リガンドの解析を進めた.Sortilinが同定した新規リガンドの輸送に関与するかを検討するため,Sortilinの全身KOマウス及びfloxマウスを導入し,新規リガンドを発現する細胞特異的にSortilinをKOすることを試みた.しかしながら,全身KOマウス及びコンディショナルKOマウス共に作出に時間がかかり,実験へ供与可能なマウスを得ることが出来なかった.引き続きマウスの作製を行い,細胞レベル及び個体レベルでのSortilinと新規リガンドの機能相関に関する解析を行っている.
また,昨年から引き続きSortilin組換蛋白質の結晶化に取り組み,リガンド非結合型Sortilinの結晶化と構造決定に成功した.興味深いことに,SortilinはpHに依存して2量体化していた.そこで,この2量体化に関与すると思われるアミノ酸残基の変異体を作製し解析したところIFN-α輸送活性へ影響を与えたことから,SortilinのpHに依存した2量体化はIFN-α輸送活性に重要であることが明らかとなった.また,Sortilinの新規リガンドを発現する動物細胞株の樹立も行い,予備的精製を行った.現在,大量精製系の構築を行っている.

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2018 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (2件)

  • [国際共同研究] NIH(米国)

    • 国名
      米国
    • 外国機関名
      NIH
  • [雑誌論文] Crystal structure of the ligand-free form of the Vps10 ectodomain of dimerized Sortilin at acidic pH2018

    • 著者名/発表者名
      Yabe-Wada Toshiki、Matsuba Shintaro、Unno Masaki、Onai Nobuyuki
    • 雑誌名

      FEBS Letters

      巻: 592 ページ: 2647~2657

    • DOI

      10.1002/1873-3468.13181

    • 査読あり
  • [学会発表] サイトカイン輸送に関与するSortilinの転写後発現制御機2018

    • 著者名/発表者名
      和田俊樹,松葉慎太郎,小内伸幸
    • 学会等名
      第28回日本樹状細胞研究会
  • [学会発表] 酸性条件下で2量体化するSortilinの結晶構造2018

    • 著者名/発表者名
      和田俊樹,松葉慎太郎,海野昌喜,小内伸幸
    • 学会等名
      第41回日本分子生物学会年会

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公開日: 2019-12-27  

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