| 研究実績の概要 |
本年度は、より効率的な化合物探索に向けて、ポテックスウイルス属ウイルスのin vitro翻訳・複製系の構築を行った。タバコBY-2培養細胞のプロトプラストからパーコールを用いた密度勾配遠心によって液胞を除いて得られる抽出液（脱液胞化タバコBY-2培養細胞抽出液; BYL）を用いた。BYLにポテックスウイルス属のpotato virus X (PVX)のRNAを加え、翻訳反応を行ったところ、PVXゲノムにコードされる複製酵素が検出された。この複製酵素翻訳後のBYLにRNA合成基質を加えて反応させたところ、新生鎖RNAの合成が確認された。これにより、PVXのin vitro翻訳・複製系の確立に成功した。この系は今後化合物探索の効率化に寄与すると考えられる。本年度はさらにこの系を用いて、ポテックスウイルス属ウイルスの増殖を阻害することが明らかとなっている抵抗性遺伝子JAX1について、その詳細な機能メカニズムの解析をおこなった。その結果、JAX1はBYL内で、ウイルスの複製酵素の翻訳は阻害しないが、ウイルスの複製を阻害することが明らかとなった。次に、複製酵素の翻訳後に形成される複合体（複製複合体前駆体）にJAX1が与える影響を解析した。膜成分を除いたBYLの画分中で、PVXの複製最小単位（レプリコン）のRNAを用いて、in vitro翻訳複製反応を行ったところ、PVXの複合体前駆体は1,000 kDaを超える複合体であることが分かった。JAX1存在下で複製複合体前駆体を検出すると、JAX1が野生型PVXレプリコンの複合体前駆体にはターゲティングするが、JAXの抵抗性を打破するPVXのレプリコンの複合体前駆体にはターゲティングしないことが示された。以上から、JAX1はPVXの複製複合体前駆体にターゲティングすることによりPVXの複製を阻害することが示唆された。
|
