研究課題
世界中の養鶏場で深刻な問題となっているワクモの新規防除用ワクチンの開発を目指した。本研究では、マレック病弱毒生ワクチンにワクモ抗原遺伝子を組み込み、マレック病の発症予防に加え、ワクモ防除も可能となるワクチン開発を試みた。マレック病ワクチンはほぼ全ての鶏に接種されており、抗ワクモワクチンの実用化を目指すうえで、本研究はワクチン接種にかかる負担軽減に貢献する基礎研究となることが期待される。ワクモ抗原発現プラスミドを作製し、その発現カセットをマレック病ウイルス(MDV)強毒株であるRB1B株のゲ ノムに挿入した。MDVの病原性に必須であるmeq遺伝子と、目的遺伝子を置換させることで、ワクモ抗原の発現に加え、MDVの病原性を欠失した組換えウイルスの作製を行った。ワクモ抗原遺伝子は、これまでに本研究室で同定したワクチン抗原候補を複数用いた。得られた感染性クローンについて、RFLP、PCR及び塩基配列解析により 、目的領域へのワクモ抗原遺伝子発現カセットの挿入を確認した後、得られた感染性クローンプラスミドをリン酸カルシウム法により培養細胞に導入し、ウイルスの再構成を試みた。しかしウイルスの再構成が認められなかったため、コーディングリージョンのみを挿入した感染性クローン、あるいは抗原タンパク質の機能を損なわせる変異を挿入した感染性クローンを新たに作製した。その結果、コーディングリージョンのみを挿入した感染性クローンプラスミドよりウイルスが再構成された。再構成された組換えウイルスは、親株として用いたRB1B株由来感染性クローンプラスミドより再構成した組換えウイルスと比較しても、in vitroにおける増殖性に差異は認められなかった。また組換えウイルス感染細胞においては、ワクチン抗原タンパク質の発現が確認された。このように、抗ワクモワクチン抗原を発現する弱毒組換えMDVの作製に成功した。
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すべて 雑誌論文 (12件) (うち国際共著 5件、 査読あり 12件、 オープンアクセス 3件) 学会発表 (15件) (うち国際学会 1件)
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