新規ワクモ防除用ワクチンの開発：組換えマレック病ウイルス生ワクチンの応用

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K18798
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 村田 史郎 北海道大学, 獣医学研究院, 助教 (10579163)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: ワクモ / 組換えワクチン / マレック病 / マレック病ウイルス / 感染性クローン / 組換えウイルス / 弱毒生ワクチン

研究実績の概要

世界中の養鶏場で深刻な問題となっているワクモの新規防除用ワクチンの開発を目指した。本研究では、マレック病弱毒生ワクチンにワクモ抗原遺伝子を組み込み、マレック病の発症予防に加え、ワクモ防除も可能となるワクチン開発を試みた。マレック病ワクチンはほぼ全ての鶏に接種されており、抗ワクモワクチンの実用化を目指すうえで、本研究はワクチン接種にかかる負担軽減に貢献する基礎研究となることが期待される。
ワクモ抗原発現プラスミドを作製し、その発現カセットをマレック病ウイルス（MDV）強毒株であるRB1B株のゲ ノムに挿入した。MDVの病原性に必須であるmeq遺伝子と、目的遺伝子を置換させることで、ワクモ抗原の発現に加え、MDVの病原性を欠失した組換えウイルスの作製を行った。ワクモ抗原遺伝子は、これまでに本研究室で同定したワクチン抗原候補を複数用いた。得られた感染性クローンについて、RFLP、PCR及び塩基配列解析により 、目的領域へのワクモ抗原遺伝子発現カセットの挿入を確認した後、得られた感染性クローンプラスミドをリン酸カルシウム法により培養細胞に導入し、ウイルスの再構成を試みた。しかしウイルスの再構成が認められなかったため、コーディングリージョンのみを挿入した感染性クローン、あるいは抗原タンパク質の機能を損なわせる変異を挿入した感染性クローンを新たに作製した。その結果、コーディングリージョンのみを挿入した感染性クローンプラスミドよりウイルスが再構成された。再構成された組換えウイルスは、親株として用いたRB1B株由来感染性クローンプラスミドより再構成した組換えウイルスと比較しても、in vitroにおける増殖性に差異は認められなかった。また組換えウイルス感染細胞においては、ワクチン抗原タンパク質の発現が確認された。このように、抗ワクモワクチン抗原を発現する弱毒組換えMDVの作製に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular detection and phylogenetic analysis of Ehrlichia canis in a Philippine dog (2018)
  • 著者名/発表者名: Maekawa Naoya、Konnai Satoru、Balbin Michelle M.、Mingala Claro N.、Gicana Karlo R.B.、Bernando Francis A.E.M.、Murata Shiro、Ohashi Kazuhiko
  • 雑誌名: Ticks Tick Borne Dis. 巻: 9 ページ: 266～269
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2017.09.012
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Prostaglandin E2 induction suppresses the Th1 immune responses in cattle with Johne's disease. (2018)
  • 著者名/発表者名: Sajiki Y, Konnai S, Okagawa T, Nishimori A, Maekawa N, Goto S, Ikebuchi R, Nagata R, Kawaji S, Kagawa Y, Yamada S, Kato Y, Nakajima C, Suzuki Y, Murata S, Mori Y, Ohashi K.
  • 雑誌名: Infect. Immun. 巻: in press ページ: in press
  • DOI: 10.1128/IAI.00910-17
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of immuno-inhibitory molecules in Mongolian native cattle and yak (2018)
  • 著者名/発表者名: Ochirkhuu N, Konnai S, Odbileg R, Okagawa T, Maekawa N, Murata S, Ohashi K.
  • 雑誌名: Jap. J. Vet. Res. 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] In vitro and in vivo antivirus activity of an anti-programmed death-ligand 1 (PD-L1) rat-bovine chimeric antibody against bovine leukemia virus infection. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishimori, A., Konnai, S., Okagawa, T., Maekawa, N., Ikebuchi, R., Goto, S., Sajiki, Y., Suzuki, Y., Kohara, J., Ogasawara, S., Kato, Y., Murata, S. and Ohashi, K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 12 ページ: e0174916
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0174916
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Increase of cells expressing PD-1 and PD-L1 and enhancement of IFN-γ production via PD-1/PD-L1 blockade in bovine mycoplasmosis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Goto, S., Konnai, S., Okagawa, T., Nishimori, A., Maekawa, N., Gondaira, S., Higuchi, H., Koiwa, M., Tajima, M., Kohara, J., Ogasawara, S., Kato, Y., Suzuki, Y., Murata, S. and Ohashi, K.
  • 雑誌名: Immun. Inflamm. Dis. 巻: 5 ページ: 355-363
  • DOI: 10.1002/iid3.173
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Anti-Bovine Programmed Death-1 Rat-Bovine Chimeric Antibody for Immunotherapy of Bovine Leukemia Virus Infection in Cattle. (2017)
  • 著者名/発表者名: Okagawa, T., Konnai, S., Nishimori, A., Maekawa, N., Ikebuchi, R., Goto, S., Nakajima, C., Kohara, J., Ogasawara, S., Kato, Y., Suzuki, Y., Murata, S. and Ohashi, K.
  • 雑誌名: Front. Immunol. 巻: 8 ページ: 650
  • DOI: 10.3389/fimmu.2017.00650
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of an atypical enzootic bovine leukosis in Japan by using a novel classification of bovine leukemia based on immunophenotypic analysis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishimori, A., Konnai, S., Okagawa, T., Maekawa, N., Goto, S., Ikebuchi, R., Nakahara, A., Chiba, Y., Ikeda, M., Murata, S. and Ohashi, K.
  • 雑誌名: Clin. Vaccine Immunol. 巻: 5 ページ: e00067-17
  • DOI: 10.1128/CVI.00067-17.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular Epidemiological Survey and Genetic Characterization of Anaplasma Species in Mongolian Livestock (2017)
  • 著者名/発表者名: Ochirkhuu Nyamsuren、Konnai Satoru、Odbileg Raadan、Murata Shiro、Ohashi Kazuhiko
  • 雑誌名: Vector Borne Zoonotic Dis. 巻: 17 ページ: 539～549
  • DOI: 10.1089/vbz.2017.2111
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] A canine chimeric monoclonal antibody targeting PD-L1 and its clinical efficacy in canine oral malignant melanoma or undifferentiated sarcoma (2017)
  • 著者名/発表者名: Maekawa Naoya、Konnai Satoru、Takagi Satoshi、Kagawa Yumiko、Okagawa Tomohiro、Nishimori Asami、Ikebuchi Ryoyo、Izumi Yusuke、Deguchi Tatsuya、Nakajima Chie、Kato Yukinari、Yamamoto Keiichi、Uemura Hidetoshi、Suzuki Yasuhiko、Murata Shiro、Ohashi Kazuhiko
  • 雑誌名: Sci. Rep. 巻: 7 ページ: 8951
  • DOI: 10.1038/s41598-017-09444-2
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Molecular epidemiological survey and genetic characterization of ovine gammaherpesvirus-2 in Mongolian livestock (2017)
  • 著者名/発表者名: OCHIRKHUU Nyamsuren、KONNAI Satoru、ODBILEG Raadan、MURATA Shiro、OHASHI Kazuhiko
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 79 ページ: 2040～2042
  • DOI: 10.1292/jvms.17-0203
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Intrauterine infection with bovine leukemia virus in pregnant dam with high viral load (2017)
  • 著者名/発表者名: SAJIKI Yamato、KONNAI Satoru、NISHIMORI Asami、OKAGAWA Tomohiro、MAEKAWA Naoya、GOTO Shinya、NAGANO Masashi、KOHARA Junko、KITANO Nana、TAKAHASHI Toshihiko、TAJIMA Motoshi、MEKATA Hirohisa、HORII Yoichiro、MURATA Shiro、OHASHI Kazuhiko
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 79 ページ: 2036～2039
  • DOI: 10.1292/jvms.17-0391
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection and molecular characterization of equine infectious anemia virus in Mongolian horses (2017)
  • 著者名/発表者名: SHARAV Tumenjargal、KONNAI Satoru、OCHIRKHUU Nyamsuren、TS Erdene Ochir、MEKATA Hirohisa、SAKODA Yoshihiro、UMEMURA Takashi、MURATA Shiro、CHULTEMDORJ Tungalag、OHASHI Kazuhiko
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 巻: 79 ページ: 1884～1888
  • DOI: 10.1292/jvms.17-0202
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] 日本に分布するマレック病ウイルスの分離と性状解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 村田史郎、町田柚香、種子野章、酒井英史、松山あゆ美、伊勢崎政美、今内覚、大橋和彦
  • 学会等名: 平成29年度 鶏病研究会北海道支部技術検討会
• [学会発表] 日本国内における牛白血病発症牛の分類と表現型解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 西森朝美、今内 覚、岡川朋弘、前川直也、池渕良洋、後藤伸也、佐治木大和、村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 日本ウイルス学会北海道支部会第51回夏季シンポジウム
• [学会発表] 牛白血病ウイルス（BLV）感染症におけるプロスタグランジンE2（PGE2）の動態および機能解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 佐治木大和、今内 覚、西森朝美、岡川朋弘、前川直也、池渕良洋、後藤伸也、村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 日本ウイルス学会北海道支部会第51回夏季シンポジウム
• [学会発表] Enhanced immune responses after vaccination with a gallid alphaherpesvirus 2 (Marek’s disease virus, MDV) expressing PD-1 (2017)
  • 著者名/発表者名: Shiro Murata, Benedikt B Kaufer, Nikolaus Osterrieder, Masayoshi Isezaki, Satoru Konnai and Kazuhiko Ohashi
  • 学会等名: 42nd International Herpesvirus Workshop
  • 国際学会
• [学会発表] 牛白血病ウイルス（BLV）感染ハイリスク牛における初めての子宮内感染直接証明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 佐治木大和、 今内 覚、 西森朝美、 岡川朋弘、 永野昌志、 小原潤子、 村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 平成29年度北海道地区ならびに第68回北海道獣医師大会
• [学会発表] BLV感染症をモデルとした抗ウシPD-L1キメラ抗体の臨床応用試験 (2017)
  • 著者名/発表者名: 西森朝美、今内覚、岡川朋弘、前川直也、池渕良洋、後藤伸也、佐治木大和、鈴木定彦、小原潤子、小笠原諭、加藤幸成、村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] 牛白血病ウイルス（BLV)感染症においてプロスタグランジンE2（PGE2）が及ぼす免疫抑制機序の解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 佐治木大和、今内覚、西森朝美、岡川朋弘、村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] COX-2阻害薬と抗PD-L1抗体の併用によるイヌ腫瘍疾患の制御法の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 浅野裕美恵、今内覚、岡川朋弘、前川直也、西森朝美、後藤伸也、高木哲、村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] マレック病ウイルス弱毒株を用いた新規抗ワクモワクチン開発に向けた基礎研究 (2017)
  • 著者名/発表者名: 青山珠里愛、村田史郎、伊勢崎政美、種子野章、酒井英史、今内覚、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] PD-L1を標的としたイヌ用キメラ抗体医薬の作製と悪性黒色腫および未分化肉腫罹患犬における抗腫瘍効果の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 前川直也、今内覚、高木哲、賀川由美子、岡川朋弘、西森朝美、池渕良洋、和泉雄介、出口辰弥、加藤幸成、鈴木定彦、村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] 日本に分布するマレック病ウイルス野外株の病原性の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 村田史郎、種子野章、酒井英史、町田柚香、松山あゆ美、伊勢崎政美、今内覚、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] 牛マイコプラズマ感染症における免疫抑制機序の解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 後藤 伸也, 今内 覚, 岡川 朋弘, 西森 朝美, 前川 直也, 樋口 豪紀, 小岩 政照, 田島 誉士, 小原 潤子, 加藤 幸成, 鈴木 定彦, 村田 史郎, 大橋 和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] Theileria parva感染症における免疫チェックポイント因子の動態解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 今内 覚、岡川朋弘、山田慎二、Martin Simuunza, Timothy Connelley, Ivan Morrison, 村田史郎、大橋和彦
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] 牛のアナプラズマ病における免疫疲弊機序の解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 岡川朋弘、今内覚、James R. Deringer、Massaro W. Ueti、Glen A. Scoles、村田史郎、大橋和彦、Wendy C. Brown
  • 学会等名: 第63回寄生虫/衛生動物学会 北日本支部合同大会
• [学会発表] ワクモ（Dermanysus gallinae）由来 カテプシンL様タンパク質の性状解析とワクチン抗原としての評価 (2017)
  • 著者名/発表者名: 村田史郎、伊勢崎政美、谷口綾香、北條巧、種子野章、酒井英史、宇野有紀子、市居修、伊東拓也、今内 覚、大橋 和彦
  • 学会等名: 第63回寄生虫/衛生動物学会 北日本支部合同大会