| 研究課題/領域番号 |
16K18935
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| 研究機関 | 福井大学 |
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研究代表者 |
森田 美穂子 福井大学, 学術研究院医学系部門(附属病院部), 医員 (40623872)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | IC50 / combination index / apoptosis / XOD activity |
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| 研究実績の概要 |
これまではHL60細胞を主体として実験していた。
本年はCEM細胞でXTTを用いて、細胞増殖抑制を評価した。6MPのIC50は 0.9 μM for 6MPであった。 Febuxostatとallopurinolは100 μMの濃度でもIC50に達しなかった。6MPのIC50は4 μMのfebuxostatの存在下において0.67 μMであった。一方10 μMの allopurinol存在下における6MPのIC50は0.92 μMであった。
相乗相加効果の有無を検討するためにcombination index (CI)を測定した。 6MPとfebuxostatの併用では0.114を呈し、明らかな相乗効果と評価できた。また、6MPとallopurinolの併用でも0.119であり、明らかな相乗効果と確認できた。
細胞死を評価するためにアネキシンVを用いて、フローサイトメトリーを実施した。6MPと両XOD阻害薬（febuxostatおよびallopurinol）併用でアポトーシスの増加は認めなかった。
XOD活性測定として、キサンチンオキシダーゼ蛍光分析を行った。コントロールのXOD活性は 84 μU/mlであった。febuxostat存在下での2，6，24時間でのXOD活性はそれぞれ74.7 μU/ml、 67.8 μU/ml、45.8 μU/mlであった。同様にallopurinol存在下でのXOD活性は2，6，24時間でそれぞれ71.0 μU/ml、60.8 μU/m、55.0 μU/mlであった。allopurinolの6時間XOD活性は、febuxostatよりも強力なXOD阻害作用を示唆し、これはオキシプリノールの作用によると考えられた。24時間値のXOD活性はfebuxostatはアロプリノールより長時間強力にXOD阻害活性を有することを示唆すると考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
産休および育休取得のため。
XOD活性測定は、検出感度以下のごく微量であることも多く、測定に失敗することも多いため。
細胞死の検討においては、予想と異なる結果であり、再現実験を繰り返したり、その原因探求に時間がかかっているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
研究補助者の確保を行う。
現時点ではアポトーシスの実験結果は、予想に反するものであったため、再実験を予定し、再現性の有無を確認する。また再現性があるようであれば、なぜアポトーシスの誘導が増加しないのかにも着眼点をおいて検討する予定である。
浮遊細胞での結果を踏まえて、肝細胞など固形細胞での検討も考慮する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
産休育休の取得による実験計画の遅れのため。
これまで研究補助者の確保が困難であったため、人件費計上していなかったため。
今後は、研究補助者の協力も得ながら、実験を可及的速やかに遂行し、学会発表・論文発表が進むようににも努める。
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